خالص سازی توکسین اپسیلون از سویه واکسینال کلستریدیوم پرفرنژنس تیپ D با استفاده از کروماتوگرافی تبادل یون و ژل فیلتراسیون

Abstract

باکتری کلستریدیوم پرفرنژنس تیپ D در بره‌ها، گوساله‌ها، کره اسب‌ها، بچه خوک‌ها و جوجه‌ها باعث ایجاد بیماری انتروتوکسمی یا pulpy kidney می‌شود. هم‌چنین در انسان، عامل بیماری enteritis necroticans می‌باشد. مهم‌ترین توکسین تیپ D توکسین اپسیلون است. این توکسین به عنوان مهم‌ترین فاکتور ویرولانس باکتری کلستریدیوم پر فرنژنس تیپ D در بیماری‌زایی به شمار می‌رود. در مطالعه‌ی حاضر، عملیات خالص‌سازی توکسین اپسیلون با استفاده از تکنیک‌های مختلف کروماتوگرافی نظیر کروماتوگرافی تعویض کاتیون CM-Sepharose و ژل فیلتراسیون Sephadex-G100 با هدف ابداع روشی جدید و اقتصادی به منظور خالص‌سازی توکسین اپسیلون انجام شد. پس از کشت باکتریایی، MLD نمونه‌ی حاصل از کشت باعث مرگ موش‌ها تا رقت 8000/1 گردید. هم‌چنین نمونه‌ی کشت اولیه باعث مرگ سلول‌های MDCK در کشت سلولی شد. بهترین غلظت نمک سولفات آمونیوم جهت ترسیب و تغلیظ نمونه‌ی کشت باکتریایی 60 درصد تعیین شد. پس از عملیات ترسیب، تغلیظ و دیالیز، نمونه‌ی خام روی کروماتوگرافی تعویض کاتیون CM-Sepharose بارگذاری شد. توکسین اپسیلون در غلظت نمک 100 میلی‌مولار خارج گردید. توکسین اپسیلون بر اساس فعالیت توکسین در مراحل مختلف خالص‌سازی حدود 9/138 برابر خالص شد. وزن مولکولی این توکسین حدود 34 کیلو دالتون تعیین گردید. با توجه به یافته‌های این تحقیق، روش‌های استفاده شده در عملیات خالص‌سازی این توکسین مناسب می‌باشد و توکسین به دست آمده دارای میزان فعالیت و درجه‌ی خلوص مناسبی است.