جداسازی و شناسایی مولکولی ویروس های برونشیت عفونی طیور در مرغداریهای صنعتی ایران

Abstract

هدف : شناسایی مولکولی ویروسهای برونشیت عفونی طیور به روش RT-PCR/RFLPs از مرغداریهای صنعتی ایران. طرح : مطارعه طولی بین سالهای 1382-1377 نمونه‌ها: نمونه‌های بافتی نای، کلیه و ریه گله‌های مشکوک به بیماری تنفسی. روش : نمونه‌های بافتی ارجاع شده به آزمایشگاه ویروس شناسی طیور بخش بیماریهای طیور دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران طی سالهای 1382-1377 از گله‌های گوشتی و تخمگذار به تخم مرغ‌های جنین دار 9-8 روزه تلقیح شد. 12 جدایه از ویروس‌هایی که در پاساژ سوم باعث تاخیر در رشد جنین، رسوب اورات در مزونفرون‌ها یا مرگ جنین شده و از نظر هماگلوتیناسیون گلبول قرمز مرغ منفی بودند و همچنین 5 سویه رفرانس 793/B , D274, M41, D1466, H120 برای آزمایشات مولکولی RT-PCR/RFLPS انتخاب شدند. RNA ویروس استخراج و به کمک آنزیم رونوشت برداری معکوس به cDNA تبدیل و متعاقب آن به کمک تکنیک PCR با استفاده از ژل آگار 1 درصد الکتروفورز شده و نمونه‌های مثبت در PCR که باند اختصاصی بیش از 1600 جفت باز را نشان می‌دادند توسط آنزیم‌های محدودگر Hae III , EcorI , Hind III هضم شده و الگوهای هضم آنزیمی (RFLPS) نمونه‌های مثبت با الگوی RFLPS سویه‌های رفرانس 793/B , D274, M41, D1466, H120 با استفاده از ژل آگار 1 درصد الکتروفورز و مقایسه شدند. نتایج : از 12 نمونه مثبت در RT-PCR در هضم آنزیمی با HacIII، 8 نمونه الگوی 793/B و بقیه الگوی تیپ Mass را در RFLPS نشان دادند. نتیجه‌گیری : با توجه به اینکه 793/B نسبت به سویه واکسینال H120 ماساچوست نوعی سروتیپ با همولوژی پایین بوده و می‌تواند تا حدودی مسئول واگیری برونشیت در گله‌های واکسینه و توجیه کننده شکست در واکسیناسیون این بیماری باشد، جداسازی و شناسایی این سروتیپ ممکن است مقدمه‌ای برای تغییر سیاست کنترل و پیشگیری علیه بیماری برونشیت عفونی باشد.