تولید آنتی‌بادی پلی‌کلونال علیه پروتئین حرکتی ویروس پیچیدگی زرد برگ گوجه‌فرنگی و بررسی کارآیی آن در ردیابی ویروس

Abstract

بیماری ویروسی پیچیدگی ­زرد برگ گوجه ­فرنگی از مهم­ترین بیماری­های ویروسی گوجه­ فرنگی (Solanum lycopersicum L.) در مناطق گرمسیری و نیمه ­گرمسیری و گلخانه­های مناطق معتدل جهان به‌شمار می­رود. به‌منظور تولید آنتی­ بادی علیه ویروس عامل بیماری برای استفاده در ردیابی و معرفی کیت تشخیص بیماری، پروتئین حرکتی همسانه ­سازی شده ویروس در ناقل بیانی pET26(b)+، از سویه BL21(DE3) باکتری Escherichia coli بیان شد و پروتئین نوترکیب استخراج و به خرگوش تزریق شد. آنتی‌سرم تهیه شده، به­منظور بررسی کارآیی در ردیابی پروتئین بیان شده در باکتری و تشخیص ویروس در گیاهان آلوده، در آزمون‌های وسترن­بلات و الایزا مورد استفاده قرار گرفت. در آزمون وسترن­بلات و رقت 1 به 1500 آنتی­سرم، باند 13 کیلودالتونی مربوط به پروتئین حرکتی ویروس را در گیاهان آلوده ردیابی کرد. در آزمون الایزا و رقت 1 به 1000 آنتی­ سرم، واسرشته کردن پروتئین سبب افزایش جذب نوری در نمونه­های گیاهان آلوده شد هرچند این اختلاف از نظر آماری معنی­دار نبود. این نتایج نشان داد که آنتی­سرم تولید شده علیه پروتئین حرکتی ویروس پیچیدگی زرد برگ گوجه­فرنگی برای آزمون وسترن­بلات مناسب بوده و جهت استفاده در آزمون الایزا نیاز به تخلیص آنتی­ بادی دارد.