استفاده از تکنیک PCR آشیانه¬ای برای ردیابی سریع قارچ Rosellinia necatrix عامل پوسیدگی سفید ریشه درختان از خاک و ریشه

Abstract

بیماری پوسیدگی سفید ریشه یکی از مهم­ترین بیماری­های درختان میوه در دنیا و ایران می­باشد که توسط قارچ Rosellinia necatrix ایجاد می­شود. به­منظور ردیابی سریع بیمارگر از خاک و ریشه، شش سری خاک از کنار طوقه درختان آلبالو آلوده و دو نمونه خاک به عنوان شاهد منفی و مثبت جمع­آوری گردید. استخراج مستقیمDNA از هشت سری خاک مذکور و ریشه­های آلبالو دارای میسلیوم­های سفید و خاکستری روی پوست، ریشه­های دارای میسلیوم­های بادبزن مانند و ریشه بدون علائم و هم­چنین دو ریشه باقلا (گیاه آزمون) دارای ریشه­های آغشته به میسلیوم روی سطح ریشه و ریشه­های فاقد علائم صورت گرفت. ردیابی بیمارگر از خاک و ریشه با استفاده ازآغازگرهای اختصاصی R2، R8 و R7، R10 در Nested PCR انجام شد. طبق نتایج به­دست آمده، از تمام شش سری خاک، ریشه­های آلبالوی دارای میسلیوم­های سفید و خاکستری و میسلیوم­های باد­بزن مانند و ریشه­های باقلا دارای علائم، بیمارگر ردیابی شد. ردیابی قارچ از ریشه­های بدون علائم در مورد هر دو میزبان امکان­پذیر نشد. در ادامه توالی ناحیه ITS جدایه مورد آزمایش تکثیر، همسانه سازی و تعیین توالی نوکلئوتیدی گردید. نتایج هم­ردیف سازی توالی مورد نظر با توالیR. necatrix ثبت شده موجود در بانک ژن نشان داد که جدایه به­دست آمده از خاک حداکثر شباهت (99/98%) را با جدایه شناخته شده R. necatrix دارد. با توجه به یافته­های این پژوهش به نظر می­رسد تکنیک Nested PCR توانائی خوبی در ردیابی سریع و مقادیر کم قارچ در خاک­های آلوده و ریشه گیاهان را دارد.