خالص‏سازی و تعیین ویژگی‏های آمیلوپولولاناز مقاوم به حلال و نمک‏دوست خارج سلولی جدا شده از آرکی نمک‏دوست Halorubrum سویه Ha25

Abstract

مقدمه : نمک­دوست­ها، به ویژه هالوآرکی­ها یکی از مهم‏ترین گروه­های میکروارگانیسم­های افراطی­دوست هستند. هیدرولازها ی نمک­دوست بسیار مطالعه شده­اند و برای کاربردهای صنعتی و زیست فن­آوری مورد توجه هستند. با توجه به اهمیت هیدرولازهای نمک­دوست، مطالعه حاضر اولین گزارش در مورد خالص­سازی آنزیم آمیلوپولولاناز از یک آرکی نمک­دوست است . مواد و روش ‏‏ ها: آرکی نمک­دوست Halorubrum سویه Ha25 آنزیم آمیلوپولولاناز خارج سلولی نمک­دوست و مقاوم به حلال را در غلظت بالای نمک سدیم کلراید تولید می­کند. به منظور خالص­سازی آنزیم، از رسوب­دهی پروتئین­ها با حلال اتانول و کروماتوگرافی تعویض آنیونی استفاده شده وجرم مولکولی آنزیم بعد از تخلیص، به کمک روش SDS - PAGE تعیین شد. بعد از تخلیص آنزیم، ویژگی­های آنزیم بررسی شد. به منظور تعیین پایداری آنزیم در حضور حلال­های آلی، محلول­ آنزیمی به طور جداگانه در مجاورت هفت حلال آلی قرار گرفت. در انتها محصول عملکرد آنزیم روی دو سوبسترای نشاسته و پولولان به روش کروماتوگرافی لایه­ی نازک بررسی شد . نتایج: جرم مولکولی آنزیم به کمک روش SDS - PAGE به میزان kDa 140 تعیین شد. بیشینه­ی فعالیت آمیلولیتیک و پولولیتیک آنزیم در دمای 50 درجه سانتی‏گراد بود. اسیدیته بهینه برای فعالیت آمیلولیتیکی 0/7 و برای فعالیت پولولیتیکی 5/7 تعیین شد. آنزیم در محدوده وسیع غلظتی صفر تا 5/4 مولار از نمک NaCl فعال بود. اثر حلال­های آلی مختلف روی فعالیت پولولیتیک و آمیلولیتیک آنزیم آمیلوپولولاناز نشان داد که آنزیم در حضور حلال­های غیر قابل اختلاط با آب دارای پایداری بیشتری نسبت به حلال­های قابل اختلاط با آب است. تنها محصول عملکرد آنزیم روی هر دو سوبسترای نشاسته و پولولان، گلوکز تعیین شد . بحث و نتیجه ‏ گیری: آرکی نمک­دوست Halorubrum سویه Ha25 ، آنزیم آمیلوپولولاناز نمک­دوست و گرمادوست را تولید می­کند. با توجه به فعالیت آنزیم در شرایطی نظیر دما و شوری بالا و آب فعال کم، این آنزیم گزینه­ای مناسب به منظور کاربردهای زیست فن­آوری، نظیر تیمار پسآب­های داراری شوری بالا، حلال­های آلی و ترکیبات نشاسته­ای است .