تثبیت آنزیم اوره‌آز روی نانو بیوفیبریل‌های آمیلوئیدی حاصل از آلبومین سرم گاوی

Abstract

<br />آنزیم اوره­آز (EC.3.5.1.5) از دسته هیدرولاز­ها است که هیدرولیز اوره را به آمونیاک و دی اکسیدکربن کاتالیز می­کند. این آنزیم کاربردهای مختلفی در متابولیسم نیتروژن، تهیه واکسن، کیت­های تشخیص اوره، صنایع نوشابه­سازی و غیره دارد. در این تحقیق از نانورشته­های آمیلوئیدی حاصل از آلبومین سرم گاوی به­عنوان بستری جدید برای تثبیت آنزیم اوره­آز استفاده شد. تولید نانو رشته‌های آمیلوئیدی با سه تکنیک طیف­سنجی کنگورد، اسپکتروفلوریمتری و اسپکتروپلاریمتری بهینه­سازی شده و رشته‌های حاصله با تصاویر میکروسکوپ الکترونی مورد تأیید قرار گرفتند. سپس آنزیم اوره­آز با استفاده از مولکول­های گلوتارآلدهید و با ایجاد پل­های عرضی روی رشته­های آمیلوئیدی تثبیت‌شده و فاکتورهای سینتیکی آن با آنزیم آزاد مقایسه شدند. بیشترین میزان تولید رشته­های آمیلوئیدی پس از 48 ساعت انکوباسیون آلبومین سرم گاوی با غلظت 10 میلی­گرم بر میلی­لیتر و دمای 70 درجه سانتی‌گراد در بافر سیترات-فسفات با pH برابر 4 به­دست آمد. آنزیم تثبیت­شده نسبت به شکل آزاد دارای قابلیت نگه­داری و پایداری بیشتری بود و فعالیت ویژه بالاتر و نیز K_m کوچکتری را نشان داد. دمای بهینه از 40 به 70 درجه سانتی­گراد و pH بهینه نیز از 6 تا 7 به 6 تا 9 در آنزیم تثبیت­شده بهبود یافت. بنابراین رشته‌های آمیلوئیدی با داشتن گروه­های شیمیایی مختلف، برای تثبیت آنزیم اوره­آز مناسب بوده­اند. بهبود ویژگی‌های سینتیکی و پایداری آنزیم اوره­آز در اثر تثبیت بر رشته­های آمیلوئیدی امکان استفاده گسترده­تر از این آنزیم را در صنایع مرتبط فراهم می­آورد. <br />