بیان توالی کدکنندۀ پروتئین شیمریک ipaD-stxB در باکتری E. coli و کاهو

Abstract

<strong>شیگلوز، یک بیماری عفونی است که توسط شیگلا ایجاد می­شود</strong><strong>.</strong><strong> پروتئین</strong><strong><em>IpaD</em></strong><strong>یکی </strong><strong>از مهم‌ترین عامل‌های بیماری‌زا در شیگلا است. برای تولید پروتئین نوترکیب، توالی کدکنندۀ </strong><strong><em>ipaD</em></strong><strong><em>-</em></strong><strong><em>stxB</em></strong><strong> </strong><strong>همسانه سازی و به ناقل بیانی </strong><strong>pET28a</strong><strong>(+)</strong><strong> منتقل و توسط </strong><strong>PCR</strong><strong>و هضم آنزیمی تأیید شد. بیان پروتئین نوترکیب در باکتری </strong><strong>(BL21)</strong><strong><em>E. coli</em></strong><strong> با </strong><strong>SDS-PAGE</strong><strong>، آزمون الایزا و لکه‌گذاری وسترن تأیید شد. در این تحقیق پروتئین نوترکیب حدود 54.87 درصد پروتئین کل باکتری را به خود اختصاص داد</strong><strong>. </strong><strong>ناقل بیانی گیاهی واجد توالی کدکنندۀ </strong><strong><em>ipaD</em></strong><strong><em>-</em></strong><strong><em>stxB</em></strong><strong> </strong><strong>با روش </strong><strong>Golden Braid 3.0</strong><strong>ساخته و با </strong><strong>کمک اگروباکتریوم سویۀ </strong><strong>C</strong><strong>58</strong><strong> در کاهو به‌صورت موقت بیان شد. بیان پروتئین نوترکیب </strong><strong><em>ipaD</em></strong><strong><em>-</em></strong><strong><em>stxB</em></strong><strong>در سطح رونویسی (ترانسکریپتوم) با </strong><strong> </strong><strong>q</strong><strong>RT</strong><strong>-</strong><strong>PCR</strong><strong>و</strong><strong>در سطح پروتئین با آزمون الایزا تأیید شد.</strong>