شناسایی قارچ‌های میکوریزآربسکولار در درختان نارنگی کینو (Citrus nobilis × Citrus deliciosa) پیوند شده برروی پایه رافلمون با استفاده ازتکنیک واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز

Abstract

درختان نارنگی کینو دوساله پیوندشده بروی پایه رافلمون با جدایه‌های مختلفی ازقارچ میکوریزآربسکولار شامل Glomus manihotis, Gigaspora gigantean, Glomus mosseae بصورت جداگانه و مخلوط مایه‌کوبی گردیدند. پنج پرایمر اختصاصی جنس‌های Glomus و Gigaspora به نام‌های VANS1, NS21, NS61 VAGLO و VAGIGA پس از ساخت و با استفاده از DNA استخراج شده از ریشه‌های آلوده به میکوریزآربسکولار با استفاده از تکنیک واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز مورد آزمون قرار گرفتند. دراین مطالعه پرایمر VAGLO بعنوان پرایمر اختصاصی جنس Glomus به همراه پرایمر VANS1 بعنوان پرایمر اختصاصی راسته گلومرال بصورت موفقیت‌آمیزی قطعه‌ای با اندازه 190 جفت باز از نمونه‌های G. mosseae و G. manihotis راتکثیرنمود. کاربرد این پرایمرها بر روی نمونه‌های حاوی G. gigantean و همچین شاهد (گیاهان مایه‌کوبی نشده) منجربه تولید این قطعه نگردید. استفاده ازجفت پرایمر VANS1-NS61 برای تکثیر قطعه نسبتاً کاملی از ژن‌های هسته‌ای با اندازه حدود 1 کیلوباز که زیر واحد کوچکی از rRNA را کد می‌نمایند موفقیت‌آمیز بود و استفاده از این قطعه بعنوان DNA الگو پس ازیک چرخه اضافی PCR (به منظورتکثیربیشتر) به همراه جفت پرایمرهای VANS1-VAGLO و VANS1-VAGIGA منجر به تولید قطعه‌ای از DNA در اندازه مورد انتظاربرای جفت پرایمراول گردید و در مورد جفت پرایمر دوم نتیجه‌ای در پی نداشت. این تحقیق به وضوح نشان‌دهنده امکان استفاده از این تکنیک بعنوان ابزاری دقیق و سریع برای نشان دادن و شناسایی قارچ میکوریزآربسکولاردرون ریشه های نارنگی کینو می‌باشد.