جداسازی و مطالعه بیوانفورماتیکی ژن عامل رونویسی TbJAMYC دخیل در بیوسنتز تاکسول از سرخدار گونه ایرانی

Abstract

داروی ضد سرطان تاکسول یا پاکلی­تاکسل از متابولیت­های بیوسنتز شده در سرخدار (<em>Taxus bacatta</em>) است. تاکسول یکی از مهمترین و کاربردی­ترین داروهای ضد سرطان در درمان سرطان ریه است که با جلوگیری از پلیمریزاسیون میکروتوبول­ها مانع از تقسیم سلولی در بافت­های سرطانی می­شود. عامل رونویسی JAMYC از خانواده MYC دارای موتیف متصل­شونده به DNA به‎نام bHLH می­باشد که در سایر گونه­های سرخدار شناسایی شده است. هدف از این تحقیق جداسازی و همسانه­سازی ژن عامل رونویسی <em>TbJAMYC</em> برای اولین بار و تجزیه‌وتحلیل بیوانفورماتیکی آن است. در ابتدا برای به‎دست آوردن گیاهچه­های این گیاه رویان از دانه­های این گیاه خارج و در محیط کشت MS حاوی زغال فعال و اسیداسکوربیک کشت شد. از RNA استخراج شده با کیفیت و کمیت خوب cDNA سنتز شد. ژن عامل رونویسی <em>TbJAMYC</em> به‎وسیله PCR از cDNA و آغازگرهای اختصاصی این ژن تکثیر شد. قطعه تکثیر شده در ناقل همسانه­سازی pTG 19 به‎روش TA کلونینگ همسانه­سازی و توالی­یابی شد. خانواده پروتئینی و دمین­های پروتئین TbJAMYC به‎وسیله نرم­افزار Pfam تعیین شدند. همچنین به‎وسیله نرم­افزار Modeller ساختار سه بعدی دمین­‏های متصل شونده به DNA این پروتئین تجزیه‌وتحلیل و مدل­سازی شد. این تجزیه‌وتحلیل‎ها نشان دادند که پروتئین TbJAMYC جزء عوامل رونویسی MYC حاوی دمین bHLH برای اتصال به DNA و تنظیم بیان ژن­ها می­باشد.