جداسازی و کلون سازی ژن آنزیم کوتیناز باکتری ترموبیفیدا فوسکا

Abstract

<em>سابقه و هدف</em>: آنزیم کوتیناز متعلق به خانواده سرین هیدرولازها است و به دلیل خواص ساختاری و عملکردی در حذف آلودگی های زیست محیطی اهمیت بسیار زیادی دارد. هدف از این پژوهش، جداسازی و کلون سازی ژن آنزیم کوتیناز از باکتری <em>ترموبیفیدا فوسکا</em> (<em>Thermobifida fusca</em><em>)</em> بود. <em>مواد و روش‌ها</em>: نمونه برداری از خاک های جنگلی شمال ایران صورت گرفت. با استفاده از محیط کشت اختصاصی و شرایط محیطی مناسب (10 pH= و دمای 60 درجه سانتیگراد) جداسازی باکتری بومی ترموفیل <em>ترموبیفیدیا فوسکا</em> انجام شد. پس از طراحی پرایمر ، ژن کوتیناز (<em>cut1</em>) از باکتری یاد شده جدا گردید. سپس در وکتور pBluescript sk کلون و به سویه DH5α <em>اشریشیا کلی</em> انتقال داده شد. به منظور تایید کلون سازی، هضم آنزیمی انجام ونمونه ها برای تعیین توالی ارسال گردید. <em>یافته‌ها:</em> در این تحقیق برای یافتن آنزیم کوتیناز با ویژگی‌های مطلوب تر‌، جداسازی و کلونینگ ژن آنزیم کوتیناز از باکتری ترموفیل بومی <em>ترموبیفیدا فوسکا </em>انجام شد. کلون سازی به کمک روش هضم آنزیمی و تعیین توالی مورد تایید قرار گرفت. با توجه به نتایج BLAST بیشترین شباهت با 98% همانندی با آنزیم کوتیناز cut1 و 96% شباهت باآنزیم کوتیناز cut-1.KW3 در باکتری <em>ترموبیفیدا فوسکا</em> مشاهده گردید. <em>نتیجه گیری</em>: با استفاده از آنزیم کوتیناز کلون شده در این تحقیق و با توجه به طیف وسیع عملکردی آن در برابر سوبستراهای متنوع و قابلیت تجزیه و سنتز انواع ترکیبات پلی استری، این آنزیم می‌تواند در رفع آلودگی‌های زیست محیطی نقش مهمی ایفا کند.