تعیین هویت مولکولی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس کمپلکس در بیماران استان فارس به وسیله تکنیک های RD Typing و PCR-RFLP

Abstract

بیماری سل، بیماری زئونوزی است که به عنوان یکی از مهم‌ترین بیماری‌های تهدید کننده انسان و دومین عامل عفونی در انسان می‌باشد. تمایز گونه‌های مختلف کمپلکس مایکوباکتریوم توبرکلوزیس به روش‌های معمول زمان برو از طرفی، تشخیص دقیق جهت درمان به موقع بیماران، نقش حیاتی را ایفا می‌نماید. لذا هدف از این مطالعه، شناسایی جنس مایکوباکتریوم و تعیین هویت مولکولی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس کمپلکس در بیماران استان فارس به وسیله تکنیک‌های RD typing و PCR-RFLP بود. ژنوم 50 جدایه با استفاده از روش جوشاندن استخراج گردید. برای تعیین جنس این جدایه‌ها از تکنیک PCR بر اساس قطعه 16S rRNA استفاده گردید. تکنیک PCR IS6110 و تکنیکRD typing نیز به ترتیب برای شناسایی و تعیین هویت باکتری مورد استفاده قرار گرفت. در نهایت، با استفاده از تکنیک‌های RD typing و PCR-RFLP بر روی ژن oxyR جهت تعیین هویت مایکوباکتریوم‌/تعیین گونه مایکوباکتریوم انجام شد. تمامی جدایه‌ها با استفاده از تکنیک PCR برای16S rRNA باند 543 جفت باز را نمایش دادند و با استفاده ازPCR برایIS6110، باند 245 جفت باز را نمایش دادند که مایکوباکتریوم توبرکلوزیس کمپلکس را اثبات کردند. در تعیین هویتRD typing،RD1، RD4، RD9 و RD12 به ترتیب باندهای 146،172،235و 365 شناسایی شدندکه مشخص شد تمامی جدایه‌های مورد مطالعه گونه توبرکلوزیس می‌باشند. با استفاده از تکنیک PCR-RFLP روی ژن کاذب oxyR هویت مولکولی RD typing تایید شد. نتایج در این مطالعه نیز نشان‌دهنده قدرت تکنیک RD typing درتمایز بین مایکوباکتریوم‌ها می‌باشد و مشخص گردید تمام جدایه‌های ارسالی از شیراز، مایکوباکتریوم توبرکلوزیس هستند و مایکوباکتریوم بویس مشاهده نشد. عدم وجود گونه بویس در جدایه‌های ارسالی از شهر شیراز، نشان‌دهنده بهداشت مناسب شیر پاستوریزه در این شهر می‌باشد.