شناسایی سریع Clostridium perfringens تایپ‌هایA، B،C، D به روش Multiplex PCR

Abstract

Clostridium perfringens بخشی از فلور طبیعی خاک می‌باشد و گزارشات متعددی از جدا شدن این ارگانیسم از مواد غذایی خام و پخته وجود دارد. این باکتری به پنج تایپ A تا E تقسیم شده است و این تقسیم بندی بر اساس تولید سم آلفا، بتا، اپسیلون و یوتا می‌باشد. در این مطالعه از واکنش multiplex PCR جهت شناسایی باکتری Cl. perfringens تایپ‌هایA, B,C, D استفاده شد. تائید اولیه تیپ‌های باکتریایی مورد استفاده با روش بیوشیمیایی و سرولوژیکی صورت گرفت. جهت شناسایی بوسیله PCR، چهار جفت پرایمر با دمای ذوب نزدیک به هم طراحی گردید. قطعات تکثیر یافته برای تیپ‌ A، 1167 جفت باز (سم آلفا) و برای تیپ‌ B، 1167 و 1025 و 961 جفت باز (سم آلفا، سم بتا و سم اپسیلون) و برای تیپ‌ C، 1167 و 1025 جفت باز (سم آلفا و سم بتا) و برای تیپ‌ D، 1167 و 961 جفت باز (سم آلفا و سم اپسیلون) بود. جهت بررسی ویژگی واکنش از باکتری Cl. botulinum به عنوان کنترل منفی استفاده شد که نتایج PCR آن با پرایمرهای طراحی شده منفی بود. نتایج این تحقیق نشان داد که شناسایی کلستریدیوم پرفرنجنس با استفاده از multiplex PCR بسیار ساده، حساس، اختصاصی و در حداقل زمان بوده و می‌توان جهت تعیین تایپ‌های A, B,C, D Cl. perfringens استفاده نمود.