ارزیابی آثار غلظت‌های مختلف ال- آرژنین بر القای ‌کلونی‌زایی سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی منجمد- ذوب‌شده بز در کشت کوتاه‌مدت

Abstract

سابقه و هدف: با توجه به اهمیت توسعه روش­های کشت و انجماد سلول­های بنیادی اسپرماتوگونی به عنوان اساس مطالعه‌های ژنتیکی، طب بازساختی، طراحی حیوانات تراریخته و داروهای نوترکیب، تلاش برای ایجاد یک سیستم کشت مناسب اهمیت فراوانی دارد. هدف از انجام مطالعه حاضر، ارزیابی آثار غلظت­های مختلف اسید­آمینه ال- آرژنین بر تکثیر اسپرماتوگونی­های منجمد- ذوب شده بز در شرایط آزمایشگاه است. روش کار: مطالعه حاضر تجربی است و پنج بار تکرار انجام شد. سلول­های بنیادی اسپرماتوگونی با استفاده از روش هضم آنزیمی دو مرحله­ای از بیضه­های بزغاله­های نابالغ استخراج و با حذف تمایزی تخلیص شد. پس از انجماد- یخ‌گشایی در یک دوره کشت 10 روزه در شش گروه آزمایشی شامل گروه شاهد (کشت سلول­ها در محیط پایه DMEM حاوی 1 درصد آنتی‌بیوتیک و 5 درصد سرم جنینی گاو) و تیمار­های 2، 3، 4، 5 و 6 به ترتیب شامل محیط پایه به اضافه غلظت­های 50، 100، 200، 500 و 1000 میکرومول بر لیتر ال- آرژنین، کشت داده شدند. تعداد و مساحت کلونی­های تشکیل شده در روز­های 4، 7 و 10 بررسی شد. داده‌ها با آزمون آنالیز واریانس یک‌طرفه و آزمون تکمیلی توکی در سطح 5 درصد با نرم‌افزار آماریMinitab 16 آنالیز شدند. برای شناسایی سلول‌های اسپرماتوگونی از آزمون RT- PCR نشانگرهای ID4، BCL6، PGP9.5، PLZF، VASA و OCT-4 استفاده شد. یافته‌ها: درصد حیات سلول‌ها پس از جداسازی و افزودن محلول انجماد به ترتیب 2/6 ± 87/14 و 1/21 ± 80/73 بود که پس از یخ‌گشایی به 1/26 ± 65/38 رسید (0/05 > P). تعداد و مساحت کلونی­های اسپرماتوگونی تشکیل شده در تیمار چهار (غلظت 200 میکرومول ال- آرژنین) با دیگر گروه­های آزمایشی از نظر آماری تفاوت معناداری داشت (0/05 > P). همچنین سلول‌های جدا شده نشانگرهای سطحی مربوط به سلول‌های بنیادی را بیان کردند. نتیجه‌گیری: احتمالاً افزودن غلظت 200 میکرومول بر لیتر ال- آرژنین به محیط کشت آثار مطلوبی بر القای کلونی­زایی سلول­های منجمد- ذوب­شده اسپرماتوگونی بز به صورت کشت کوتاه‌مدت و در شرایط آزمایشگاهی دارد.