مطالعه فلور میکروبی روده جوجه های محلی برای یافتن پروبیوتیک های باسیلوس سوبتلیس و باسیلوس کوآگولانس و بررسی تاثیر آن بر بیان ژن های بیماری زای ctxm و luxs در جدایه های بیماری زای اشریشیاکولی

Abstract

زمینه و هدف: از آنتی‌بیوتیک‌ها به‌طور گسترده‌ای در سراسر جهان استفاده می‌شود. بااین‌حال، به دلیل ظهور مقاومت آنتی‌بیوتیکی در طیف وسیعی از میکروارگانیسم‌ها، استفاده از آن‌ها در سطح جهانی دچار شکست بزرگی شده است. استفاده از پروبیوتیک‌ها به‌عنوان درمان مکمل و جایگزین برای آنتی‌بیوتیک‌ها مطرح‌شده‌اند. هدف از پژوهش حاضر بررسی اثرات پروبیوتیک‌های جداشده از مرغ‌های محلی بر بیان ژن‌های luxS, ctxM در اشریشیاکلی ‌مقاوم به درمان بود. روش کار: 300 نمونه مدفوعی در فاصله اردیبهشت تا مهرماه سال 1399 از بیماران مراجعه‌کننده به بیمارستان امام خمینی تهران اخذ شد و با محیط‌های کشت اختصاصی و آزمایش‌های بیوشیمیایی نمونه‌های اشریشیاکلی جداسازی شد و سپس توسط PCR با پرایمرهای اختصاصی وجود ژن‌های luxS و ctxM مورد شناسایی قرار گرفت. جهت استخراج سویه‌های بومی باسیلوس کوآگولانس و باسیلوس سوبتلیس محتویات روده تعداد 9 قطعه جوجه محلی که هیچ آنتی‌بیوتیکی مصرف نکرده بودند کشت، جداسازی و توسط روش‌های بیوشیمیایی و PCR شناسایی شد. سویه‌های تجاری باسیلوس سوبتلیس و باسیلوس کوآگولانس برای مقایسه اثرات با باکتری‌های بومی خریداری شده و در ادامه این سویه‌ها در کشت هم‌زمان با سویه‌های اشریشیاکلی مقاوم به درمان حاوی ژن‌های ctxm و luxs قرار گرفتند. جهت بررسی تأثیر این پروبیوتیک‌ها بر بیان ژن‌ها از ریل تایم PCR استفاده شد. یافته ها: از 300 نمونه مدفوعی گرفته‌شده 40 جدایه(5/7 درصد) اشریشیاکلی به دست آمد؛ که 13 نفر از نمونه‌ها(5/32 درصد) مربوط به بیماران سرپایی و 27 نفر را(5/67 درصد) بیماران بستری تشکیل می‌دادند. همه ایزوله‌ها از زنان و مردان با رنج سنی بین 21 تا 62 سال جداشده بودند. 4 سویه اشریشیاکلی جداشده از بیماران حامل ژن‌های ctxM, luxS, بودند. جداسازی باسیلوس کوآگولانس و باسیلوس سوبتلیس از نمونه‌ها با آزمایش‌های بیوشیمیایی و مولکولی تائید شد.‌‌‌‌‌‌‌‌ سویه تجاری باسیلوس کوآگولانس بیان ژن‌های، ctxM, luxS را به ترتیب به میزان 3/3‌‌‌‌‌‌‌‌‌، 2/7‌‌‌‌‌‌‌‌‌ برابر کاهش و سویه بومی بیان این ژن‌ها را به ترتیب 6/3‌‌‌‌‌‌‌‌‌، 2/2‌‌‌‌‌‌‌‌‌ برابر نسبت به گروه کنترل در باکتری اشریشیاکلی کاهش داد. نتایج آنالیز آماری نشان داد که بین حضور پروبیوتیک‌های بومی و تجاری موجود درکشت و کاهش بیان ژن‌های ctxM و luxS ارتباط ‌معنی‌داری وجود دارد. نتیجه‌‌‌‌‌‌‌‌‌گیری‌‌‌‌‌‌‌‌‌: مصرف مکمل باسیلوس کوآگولانس و باسیلوس سوبتلیس با کم کردن بیان ژن‌های مقاومت باعث افزایش تأثیر آنتی‌بیوتیک‌ها بر اشریشیاکلی مقاوم به درمان می‌شوند.