بررسی اثرپارامترهای تاثیرگذار بر اسپرم های انسانی کپسوله شده در هیدروژل آلجینات در طی روند انجماد

Abstract

زمینه و هدف: انجماد اسپرم فرایند اجتناب ناپذیری است که در مراکز درمان ناباروری انجام می‌شود و می‌تواند منجر به ایجاد آسیب‌هایی در اسپرم گردد و هنوز روش بهینه‌ای برای انجماد اسپرم معرفی نشده است. راهکارهای مختلفی در جهت حفظ سلول اسپرم برای مقابله با صدمات ناشی از انجماد وجود دارد که یکی از آن‌ها استفاده از کپسوله کردن سلول اسپرم با کمک آلجینات می‌باشد. هدف اصلی این مطالعه یافتن یک روش بهینه برای کپسوله کردن اسپرم برای استفاده در انجماد اسپرم می‌باشد. روش کار: در این مطالعه در چهار مرحله اثر غلظت‌های مختلف آلجینات، کلراید کلسیم، و نحوه افزودن مواد محافظ انجماد در روند کپسوله کردن اسپرم توسط آلجینات بررسی شد. در هر مرحله اسپرم‌ها بعد از کپسوله شدن با روش انجماد سریع منجمد شدند. بعد از ذوب و باز شدن آلجینات، حرکت و زنده‌مانی اسپرم بین گروه‌های مختلف بررسی شد. از روش رنگ آمیزی ائوزین-نیگروزین برای بررسی سلامت غشاء و زنده‌مانی اسپرم استفاده شد. فراساختار هیدروژل آلجینات توسط میکروسکوپ الکترونی روبشی بررسی گردید. یافته‌ها: حرکت و زنده‌مانی اسپرم در گروه آلجینات 5/1% در مقایسه با آلجینات 1% کاهش داشت. حرکت و زنده‌مانی اسپرم در گروه 150 میکرولیتر نسبت به گروه 100 میکرولیتر کلراید کلسیم روند کاهشی نشان داد. حرکت پیشرونده و تام اسپرم بین گروه افزودن محیط محافظ انجماد قبل از کپسوله کردن و بعد از کپسوله کردن اختلاف معنی‌داری وجود نداشت. گروهی که مواد محافظ انجماد را قبل از کپسوله کردن دریافت نکرده بود نسبت به همه گروه‌ها کاهش معنی‌داری را در میزان زنده‌مانی اسپرم نشان داد. میزان حرکت تام و زنده‌مانی در گروهی که قبل از کپسوله کردن زمان داشت در مقایسه با گروهی که زمان نداشت به طور معنی‌داری بیشتر بود. ساختار متخلخل هیدروژل آلجینات توسط میکروسکوپ الکترونی روبشی تایید شد. نتیجه‌گیری: آلجینات 1% به همراه 100 میکرولیتر کلراید کلسیم و استفاده از مواد محافظ انجماد قبل و بعد از کپسوله کردن روش مناسبی برای کپسوله کردن اسپرم انسان توسط آلجینات به منظور انجماد می‌باشد. این مطالعه نشان داد که آلجینات می‌تواند برای کپسوله کردن اسپرم انسان مورد استفاده قرار بگیرد و مطالعات آینده باید تأثیر آلجینات در انجماد اسپرم را مورد بررسی قرار دهند.