استخراج و ارزیابی مولکولی پروتئین های عمده غشای خارجی بروسلا آبورتوس S99

Abstract

خلاصه سابقه و هدف: بروسلا باکتری گرم منفی، کوکوباسیل، هوازی، درون سلولی اختیاری، غیرمتحرک و فاقد اسپور می باشد. که طیف گسترده ای از حیوانات و همچنین انسان را آلوده می نماید. امروزه پروتئین های غشای خارجی (OMPs) بروسلا به عنوان ساختارهای ایمونو‍‍ژنیک جهت طراحی و تولید واکسن زیر واحدی برای پیشگیری از بروسلوزیس انسانی مورد توجه قرار گرفته اند. مواد و روش ها: پروتئین های عمده غشای خارجی از سویه صاف بروسلا آبورتوسS99 از سلول‌های سونیکه شده به واسطه اولتراسانتریفیگاسیون و پیش هضم آنزیمی با لیزوزیم، استخراج و به وسیله کروماتوگرافی تبادل یونی و ژل فیلتراسیون به طور خالص تخلیص شدند. مقدار کل پروتئین تخلیص شده توسط دستگاه نانودراپ اندازه گیری شد. با استفاده از SDS–PAGE، پروفایلی از پروتئین های غشاء خارجی بروسلا آبورتوس S99 به دست آمد که براساس وزن مولکولی از یکدیگر تفکیک شدند. در الگوی الکتروفورتیکی به دست آمده، پورین‌ها تخلیص شدند. در نهایت آزمون پیروژنی و سمیت غیر نرمال طبق پروتکل سازمان بهداشت جهانی روی نمونه‌های تخلیص شده انجام شد. نتایج: غلظت پروتئین های عمده غشای خارجی استخراج شده در این مطالعه برابر mg/ml 27/6 بود که با توجه به الگوی الکتروفورتیک به دست آمده از SDS–PAGE، وزن مولکولی نمونه استخراج شده در محدوده ی 36-38 کیلودالتون می باشد. بر اساس وزن مولکولی محاسبه شده، این پروتئین ها در گروه پورین ها قرار می گیرند. نتیجه ی آزمون پیروژنی و سمیت غیر نرمال روی نمونه‌ها منفی بود. نتیجه گیری: روش به کار رفته در این مطالعه به منظور تخلیص پروتئین های عمده غشای خارجی بروسلا آبورتوس S99 با غلظت بالا روشی مناسب و کارآمد بوده و با استفاده از این روش، پورین های باکتری به صورت اختصاصی قابل استخراج می باشند. نتیجه ی آزمون پیروژنی و سمیت غیر نرمال بی‌زیانی مصرف آنها را در مدل‌های حیوانی و مصارف انسانی تایید می‌نماید.