بررسی میزان ترشح خارج سلولی پپتید ضد سرطان VEGF111b در سلول های انسانی HEK-293

Abstract

سابقه و هدف: VEGF111b یک ایزوفرم جدید از فاکتورهای رشد اندوتلیال عروقی (VEGF) است که اخیرا به­ عنوان یک داروی ضد سرطان مطرح شده است. هدف مطالعه حاضر بررسی میزان ترشح این پروتئین از دیواره سلول­ های HEK293 به­ منظور تولید تجاری این فاکتور نوترکیب است.

مواد و روش ها: توالی VEGF111b توسط نرم­افزار OLIGO و اطلاعات ژن بانک NCBI طراحی و داخل وکتور pBUD.cE4.1کلون شد. وکتور نوترکیب pBUD.VEGF111b با استفاده از کیت لیپوفکتامین به داخل سلول­ های HEK293 ترانسفکت شد. تولید VEGF111b 48 ساعت بعد از ترانسفکشن در عصاره لیز سلولی توسط وسترن بلاتینگ و آنتی ­بادیHuman anti-VEGF بررسی شد. میزان ترشح VEGF111b در عصاره لیز سلولی و محیط کشت سلولی به روش ELISA اندازه گیری گردید.

نتایج: کلونیتگ صحیح قطعهVEGF111b در وکتور pBUD.cE4.1 توسط هضم آنزیمی و ژل الکتروفورز تائید شد. مشاهده باند شارپ 12 کیلودالتن در نتایج وسترن بلات عصاره لیز سلولی نشان­گر تولید پپتید نوترکیب VEGF111b در سلول­ های HEK293 بود. نتایج الایزا در جذب نوری 450 نانومتر برای VEGF111bدر محیط کشت سلولی و عصاره لیز سلولی به­ ترتیب برابر با 2/81±19/20 pg/ml و pg/ml7/42± 32/87 بود. و در نمونه ­های کنترل منفی بیان VEGF-111b مشاهده نشد.

نتیجه گیری: یافته های این مطالعه نشان­گر قابلیت بالای انتقال و ترشح VEGF111b از دیواره سلول­ های HEK293 به محیط کشت سلولی بدون شکستگی و هضم پروتئولیتیکی است. به ­نظر می­ رسد تولید تجاری این پپتید دارویی و تخلیص از محیط کشت سلولی HEK293 با بازدهی بالا امکان­ پذیر باشد.