تخلیص Inhibin از مایع فولیکولی انسان با استفاده از آنتی‌بادی تک دودمانی

Abstract

سابقه و هدف: Inhibin پروتئینی است که در پاسخ به اثر FSH توسط سلول‌های گرانولوزا و سرتولی ترشح می‌شود و باعث کنترل ترشح FSH از هیپوفیز قدامی می‌گردد. ارزیابی این پروتئین نقش ارزنده‌‌ای در آگاهی از وضعیت باروری در زنان و همچنین پیش­آگهی از ابتلای جنین به سندروم داون و پره‌اکلامپسی دارد. اندازه­گیری غلظت Inhibin در ارزیابی وضعیت باروری مردان نیز دارای اهمیت می­باشد. تا کنون روش­های مختلف و طولانی برای تخلیص Inhibin معرفی گردیده است. هدف از این تحقیق خالص­سازی Inhibin از مایع فولیکولی با روش ایمونوافینیتی می­باشد. مواد و روش ­ ها: مایع فولیکولی جمع­آوری شده از زنان مراجعه­کننده به مرکز درمانی ابن­سینا، پس از فیلتراسیون توسط محلول سولفات آمونیوم اشباع، تغلیظ گردید. جهت جداسازی Inhibin ، از روش ایمونوافینیتی بر روی ستون کروماتوگرافی جذبی به کمک آنتی­بادی تک­دودمانی علیه Inhibin استفاده شد . پس از عبور مایع فولیکولی از ستون کروماتوگرافی جذبی ، محلول پروتئینی به دست آمده به کمک روش SDS-PAGE و وسترن بلات ارزیابی شد. نتایج: وجود تک باند 32 کیلودالتونی بعد از رنگ‌آمیزی نقره موید حضور Inhibin بود. نتیجه­ی آزمون وسترن بلات نشان­دهنده­ی شناسایی اپی­توپ توسط آنتی­بادی علیه Inhibin می‌باشد. راندمان ستون در جداسازی Inhibin با استفاده از روش کروماتوگرافی افینیتی 92 درصد می­باشد. نتیجه­گیری : این روش در مقایسه با بسیاری از روش‌های بیوشیمیایی از راندمان بالایی برخوردار می‌باشد. با این حال به دلیل عدم دسترسی به مایع فولیکولی انسان در حجم انبوه، تخلیص Inhibin توسط روش ذکر شده در این مقاله بیشتر برای کاربردهای آزمایشگاهی در مقادیر کم بوده و در مقادیر انبوه تولید Inhibin نوترکیب توصیه می­شود.