| dc.contributor.author | جعفرزاده, بهنازسادات | fa_IR |
| dc.contributor.author | سادات, سید مهدی | fa_IR |
| dc.contributor.author | یعقوبی, رامین | fa_IR |
| dc.contributor.author | بوالحسنی, اعظم | fa_IR |
| dc.date.accessioned | 1399-08-23T22:36:52Z | fa_IR |
| dc.date.accessioned | 2020-11-13T22:36:52Z | |
| dc.date.available | 1399-08-23T22:36:52Z | fa_IR |
| dc.date.available | 2020-11-13T22:36:52Z | |
| dc.date.issued | 2016-11-01 | en_US |
| dc.date.issued | 1395-08-11 | fa_IR |
| dc.identifier.citation | جعفرزاده, بهنازسادات, سادات, سید مهدی, یعقوبی, رامین, بوالحسنی, اعظم. (1395). رنگ آمیزی معکوس: روشی مؤثر برای تخلیص پروتئین HIV-1 Nef در سیستم بیان پروکاریوتی. دوماه نامه علمي ـ پژوهشي فيض, 20(5), 420-426. | fa_IR |
| dc.identifier.issn | 1029-7855 | |
| dc.identifier.issn | 2008-9821 | |
| dc.identifier.uri | http://feyz.kaums.ac.ir/article-1-3173-fa.html | |
| dc.identifier.uri | https://iranjournals.nlai.ir/handle/123456789/645383 | |
| dc.description.abstract | سابقه و هدف: پروتئین Nef، یکی از پروتئین های تنظیمی ویروس HIV، دارای اپیتوپ های حفاظت شده متعددی است که در افراد آلوده به ایدز پاسخ های ایمنی قدرتمندی علیه آن ها مشاهده شده است. بنابراین، پروتئین Nef کاندید مناسبی برای تولید واکسن می باشد. هدف این پژوهش کلونینگ و بیان پروتئین Nef در سیستم بیان پروکاریوتی و تخلیص آن به روش رنگآمیزی معکوس می باشد.
مواد و روش ها: توالی کدکننده پروتئین Nef از وکتور pUC19 توسط PCR تکثیر شد و الحاق آن به داخل وکتور بیانی pGEX6p2 انجام شد. این سازه طی فرایند ترانسفورماسیون به سویه باکتری E.coli BL21 منتقل شده و القای بیان پروتئین با استفاده از آنتیرپرسور IPTG صورت گرفت. تأیید بیان پروتئین با استفاده از آنالیز SDS-PAGE و وسترن بلات توسط آنتی بادی ضد Nef بررسی گردید. تخلیص پروتئین با استفاده از تکنیک رنگ آمیزی معکوس از روی ژل انجام شد.
نتایج: نتایج آنالیز PCR و هضم آنزیمی وجود باند واضح حدود 648 جفت باز را روی ژل آگاروز تأیید کرد که نشانگر کلونینگ صحیح ژن Nef در وکتور بیان پروکاریوتی pGEX6p2 می باشد. هم چنین، وجود باند حدود 50 کیلودالتون نشانگر بیان پروتئین Nef توسط آنتیبادی منوکلونال ضد Nef در آنالیز وسترن بلات تأیید شد. در نهایت، باند خالص شده پروتئین توسط تکنیک رنگآمیزی معکوس به دست آورده شد.
نتیجه گیری: پروتئین نوترکیب Nef بیان شده در میزبان E. coli با بازده مناسب توسط روش رنگ آمیزی معکوس تخلیص شد. پروتئین Nef در آینده به عنوان یک آنتیژن برای طراحی واکسن پروتئینی در مقابل عفونت ویروس HIV استفاده خواهد شد. | fa_IR |
| dc.format.extent | 611 | |
| dc.format.mimetype | application/pdf | |
| dc.language | فارسی | |
| dc.language.iso | fa_IR | |
| dc.publisher | دانشگاه علوم پزشکی کاشان | fa_IR |
| dc.relation.ispartof | دوماه نامه علمي ـ پژوهشي فيض | fa_IR |
| dc.relation.ispartof | Feyz Journal of Kashan University of Medical Sciences | en_US |
| dc.subject | ویروس HIV | fa_IR |
| dc.subject | Nef | fa_IR |
| dc.subject | کلونینگ | fa_IR |
| dc.subject | بیان و تخلیص | fa_IR |
| dc.subject | رنگ آمیزی معکوس | fa_IR |
| dc.subject | اشریشیاکلی | fa_IR |
| dc.subject | medicine | fa_IR |
| dc.subject | paraclinic | fa_IR |
| dc.title | رنگ آمیزی معکوس: روشی مؤثر برای تخلیص پروتئین HIV-1 Nef در سیستم بیان پروکاریوتی | fa_IR |
| dc.type | Text | en_US |
| dc.type | پژوهشي | fa_IR |
| dc.contributor.department | بخش میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد شیراز، دانشگاه آزاد اسلامی، شیراز، ایران | fa_IR |
| dc.contributor.department | بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران | fa_IR |
| dc.contributor.department | بخش تحقیقات پیوند، دانشگاه علوم پزشکی شیراز ، شیراز، ایران | fa_IR |
| dc.contributor.department | بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران | fa_IR |
| dc.citation.volume | 20 | |
| dc.citation.issue | 5 | |
| dc.citation.spage | 420 | |
| dc.citation.epage | 426 | |
