بررسی تخم تریکوسترنژیلوس های جدا شده از گوسفندان منطقه اصفهان به روش PCR-RFLP

Abstract

سابقه و هدف: تریکوسترنژیلوس یکی از انگلهای مشترک انسان و دام است که آلودگی به آن معضلی اقتصادی و بهداشتی قلمداد می گردد. لذا در این مطالعه، تخم کرم گونه ها ی مختلف تریکوستنرنژیلوس جدا شده از مدفوع گوسفندان منطقه اصفهان به روش PCR-RFLP و با استفاده از قطعه rDNA-ITS2 مورد بررسی قرار گرفت. مواد و رو ش ها: مطالعه به روش توصیفی بر روی محتویات دستگاه گوارش70 راس گوسفند کشتار شده در کشتارگاههای شهر اصفهان و خوراسگان انجام پذیرفت. تخمهای انگل با روش مستقیم و فلوتاسیون جدا و تخم کرم گونه ها ی تریکوسترنژیلوس براساس شاخصهای ریخت شناسی، شناسایی و جمع آ وری شدند، سپس با روش PCR-RFLP مورد بررسی قرار گرفتند. در مطالعه ژنوتیپی DNA ژنومی تخم کرمها، استخراج شد و واکنش PCR با پرایمراختصاصی قطعه rDNA-ITS 2 انجام گرفت. محصول PCR هر ایزوله توسط آنزیمهای محدودکننده RsaI - HinfI - DraI هضم و بر روی ژل آگارزالکتروفورز شد و از آنها عکس تهیه گردید. یافته ها : با توجه به تشابه مرفولوژی تخم گونه ها ی مختلف تریکوسترنژیلوس در زیر میکرسکوپ تشخیص افتراقی آنها امکان پذیر نمی باشد، لذا تشخیص با استفاده از الگوی ژنوتیپی تخم کرمها به روش PCR-RFLP انجام پذیرفت . اندازه محصول PCR و DNA استخراج شده از تخم کرمها یکسان و حدود 330 نوکلئوتید بود ولی الگوی PCR-RFLP گونه ها با یکدیگر متفاوت بود. پس از هضم محصول PCR آن ها با آنزیم RsaI دو قطعه حدود 138 و 190 نوکلئوتیدی مشاهده شد. محصول PCR Trichostrungylus به دست آمده، با آنزیم DraI هضم نشد، اما سه گونه T.vitrinus T.aziei و T.colubrifornoi s هضم شدند و دو قطعه حدود 110 و 215 نوکلئوتیدی در T.axei و T.colubriformis رؤیت گردید که الگویی مشابه همدیگر داشتند. اما T.vitrinus واجد دو قطعه حدود 145 و 185 نوکلئوتیدی بود. از بین چهار گونه فوق تنها محصول PCR تریکوسترنژیلوس Colubriformi s با آنزیم Hinf I هضم شد و دو قطعه حدود 90 و 238 نوکلئوتیدی روی ژل اگارز مشاهده گردید. نتیجه گیر ی : با توجه به تنوع گونه ها ی انگلی و عدم تشخیص افتراقی آنها به روش میکروسکوپی پیشنهاد می شود با استفاده از پرایمرها و آنزیمهای محدودکننده مختلف، از روش PCR در تشخیص گونه ها ی انگلی مورد نظر استفاده شود.