تخلیص هورمون hCG از ادرار زنان باردار و جداسازی زیرواحدهای آن

Abstract

سابقه و هدف: هورمون hCG از گلیکوپروتئین­های مهم دوران بارداری جهت حفظ جنین است که تقریبا 30 درصد وزن مولکولی این هورمون را قند تشکیل می­دهد. امروزه از این هورمون در درمان و هم­چنین ساخت واکسن­های ضد بارداری استفاده می‌شود. در تحقیق حاضر سعی در افرایش میزان خلوص و کوتاه کردن مسیر تخلیص این هورمون است. مواد و روش­ها: جهت تخلیص هورمون hCG از نمونه ادرار زنان باردار دو تا سه ماهه استفاده شد. نمونه جمع­آوری شده توسط بنزوات سدیم، اسید استیک و استون رسوب­دهی و تغلیظ گردید. با عبور نمونه‏ تغلیظ شده‏‏‏‏‎ از ستون کانکاناوالین A ( Con-A ) و جدا­کننده‌های دی­گلوکز و دی­مانوز ، hCG تخلیص گردید. با عبور نمونه hCG تخلیص شده از ستون DEAE-Sepharose 4B ، زیرواحدهای آلفا و بتا ی هورمون جداسازی گردید. خلوص نمونه‌ها به­وسیله SDS-PAGE و صحت آنها با روش الایزا و ایمونوبلاتینگ بررسی شد. نتایج: نمونه تغلیظ شده به­دست آمده از ادرار و نمونه hCG تخلیص شده از ستون کانکاناوالین A ، با استاندارد hCG از شرکت ارگانون از نظر وزن مولکولی و میزان خلوص ب ا روش SDS-PAGE و رنگ­آمیزی نیترات نقره مقایسه شدند . نمونه تغلیظ شده شبیه نمونه استاندارد و دارای تعدادی باند اضافی بود که باندهای اضافی بعد از تخلیص hCG حذف گردید. تایید هورمون hCG و زیرواحدهای آن با استفاده از آنتی بادی‌های مونوکلونال ضد زنجیره α و β به روش الایزا و وسترن بلات انجام گرفت. نتیجه­گیری: استفاده از قند دی­گلوکز قبل از دی­مانوز توانست باعث جداسازی hCG از سایر قطعات hCG و گلیکوپروتئین ­ ها شود.