استخراج و خالص سازی کپسول استافیلوکوک اورئوس Type 2) Smith diffuse)

Abstract

سابقه و هدف: جدا سازی و استخراج کپسول پلی ساکاریدی اولین قدم در راه تهیه و ساخت واکسن های جلوگیری کننده در عفونت های حاصل از سوش های کپسول دار استافیلوکوک اورئوس می باشد. این تحقیق به منظور استخراج و تهیه کپسول استافیلوکوک اورئوس Type 2 انجام گرفت. مواد و روش ها: تحقیق به روش توصیفی از نوع اکتشافی است. باکتری استافیلوکوک اورئوس سویه (Smith diffuse (ICH 70 بر روی محیط Broth) BHI) در انکوباتور شیکردار در شرایط هوازی و دمای 37 درجه سانتی گراد و rpm=200 و رسیدن آن به مرحله رشد نهایی، کپسول باکتری با روش اسید رقیق شده و حرارت استخراج گردید. سپس در طول شب در مقابل آب مقطر در 4 درجه سانتی گراد دیالیز شده و آنگاه لیوفیلیزه گردید. پودر لیوفیلیزه شده با استفاده از یک ستون DEAE سلولز به ابعاد cm 50×2.6 با روش گرادیانت از بافرهای 0.01M تا 1M بیکربنات آمونیوم با سرعت 60mt/h کروماتوگرافی تعویض یون Ion exchange chromatography گردیده و تخلیص شد. پلات طیف جذبی پلی ساکارید به دست آمده و کپسول خالص (استاندارد) با روش کالری متری توسط اسپکتروفوتومتر اسکن دار رسم گردید. یافته ها: پلی ساکارید کپسولی از سلول کامل در انتهای فاز رشد نهایی باکتری در 0.1HCL در 100 درجه سانتی گراد به متراکم شود. پلات های مربوط به طیف جذبی پلی ساکاریدهای حاصل و استاندارد با استفاده از روش کالری متری H2SO4/glacial acetic acid assay در فاصله 620-350 نانومتر رسم گردید و نشان داد که کروماتوگرام های حاصل از آنتی ژن تخلیص شده قبلی و پلی ساکارید جدا شده در این تحقیق تطابق کامل دارد و موید صحت کربوهیدرات کپسولی استخراج و تخلیص شده می باشد. نتیجه گیری و توصیه ها: استخراج و خالص سازی کپسول استافیلوکوک اورئوس Type 2 مقدور است و تحقیق برای ساخت واکسن های جلوگیری کننده را توصیه می نماید.