جداسازی وزیکول‎های ترشحی غشاء خارجی باکتری اشرشیاکلی با استفاده از فیلتراسیون با جریان مماسی

Abstract

زمینه و هدف: وزیکول‎های غشاء خارجی باکتری‎ها نقش مهمی در فیزیولوژی، بیماری زایی و تعامل بین میزبان و عامل بیماریزا دارند. این وزیکول‎ها به باکتری اجازه می دهند تا آنزیم‌ها و محتویات خود را به شکل محافظت شده منتقل کنند و در زنده ماندن باکتری نقش دارند. از آنجایی که آن‌ها به عنوان نماینده باکتری محسوب می شوند، مطالعه آن‌ها به شناخت بیشتر باکتری‎ها و تعامل آن‌ها با محیط کمک می‌کند. از این رو روش‎های جداسازی این وزیکول‌ها اهمیت ویژه‌ای دارد. لذا، هدف از این پژوهش، معرفی روشی نوین برای جداسازی وزیکول‎های غشاء خارجی باکتری اشرشیاکلی است. روش کار: در روش شناسی حاضر، باکتری اشرشیاکلی انتروتوکسیژنیک در شرایط استاندارد کشت داده شد. سپس مایع رویی کشت جدا گردید و از فیلتراسیون با جریان مماسی برای تغلیظ وزیکول‎ها و سانتریفیوژ دور بالا برای رسوب‌دهی آن‌ها استفاده شد. وزیکول‎های جدا شده توسط میکروسکوپ الکترونی عبوری تایید و وزن مولکولی و میزان غلظت پروتئینی مشخص گردید. یافته‌ها: ریخت شناسی وزیکول‌ها توسط میکروسکوپ الکترونی تایید و اندازه آن‌ها بین 50 تا 100 نانومتر تعیین شد. الگوی الکتروفورتیک نشان دهنده باندهای قوی و ضعیف در ناحیه بین 41-22 کیلودالتون بوده و غلظت پروتئین وزیکول‎های تخلیص شده 542 میکروگرم مشخص گردید. نتیجه‌گیری: نتایج به دست آمده نشان می‌دهد که در نتیجه استفاده از روش ارائه شده در این مطالعه علاوه بر ارائه محصولی همسان، از بعد اقتصادی و زمانی نسبت به روش‎های رایج مزایای مثبتی دارد و می‌تواند زمینه ساز جداسازی این وزیکول‌ها در سطح صنعتی نیز باشد.