دستکاری ژنتیکی سویه آکرومونیومی تولید کننده سفالوسپورین C به منظور افزایش تولید این آنتی‌بیوتیک

Abstract

میزان تولید سفالوسپورین C(CPC) در سویه‌های تولید کننده این ماده در ارتباط با میزان ابراز یا مهار ژنهای تولید کننده آن است. هدف از این مطالعه تغییر ژنتیکی سویه تولید کننده سفالوسپورین C به منظور افزایش تولید این ماده بوده است. در این بررسی از سویه استاندارد تولید کننده آکرومونیوم کرایزوژنوم 2399DSM به عنوان سویه والد استفاده شد. عملیات موتاژنز روی محیطهای تولید بهینه سازی شده با بستر جامد صورت گرفت و موتاژنهای مورد استفاده، اشعه UV و NTG بودند که میزان بهینه آنها جهت موتاژنز به دست آمد. انتخاب موتانت‌ها به صورت اتفاقی و نیز به صورت جهت‌دار (در حضور Hg++ و نیستاتین) صورت گرفت. میزان تولید موتانتها در محیطهای تولید با روشهای سنجش بیولوژیکی و HPLC بررسی شد و تولید نهایی CPC در موتانت نهایی برنامه موتاژنز با روش طیف سنجی جرمی تأیید گردید. بر اساس نتایج حاصل از این مطالعه میزان بهینه دوز موتاژن UV برابر 200 ثانیه و دوز تیمار NTG برابر با 7-5 دقیقه به دست آمد و میزان دوز مهاری Hg++ و نیستاتین روی سویه به ترتیب 006/0 و 3/0 گرم در دسی‌لیتر بود. با هر دو موتاژن و در هر دو روش انتخاب موتانتها، سویه‌های با تولید افزایش یافته CPC به دست آمدند اما اثرات UV و به کارگیری Hg++ در میزان موتاژنز و نیز در میزان افزایش تولید CPC بارزتر بود. در برترین سویه حاصل از این عملیات، تولید CPC به میزان 3/2 برابر افزایش یافت. حضور CPC در محیط تولید این سویه با نشان دادن یون مولکولی 415 در طیف جرمی آن تأیید شد. بطور کلی می‌توان نتیجه گرفت که تغییر ساختار ژنتیکی سویه مولد CPC مقدور بوده و می‌توان سویه‌های موتانت با تولید برتر را با عملیات موتاژنز به دست آورد.br