همسانه سازی و بیان ژن مولد پپتید AcAMP از قارچ Aspergillus clavatus در باکتری E. coli و بررسی تیتر آنتی بادی آن در موش سوری

Abstract

زمینه و هدف: پپتیدهای ضد میکروبی به عنوان منادی تغییر آنتی بیوتیک‌های امروزی مورد توجه قرار گرفته‌اند. پپتید ضد میکروبی AcAMP یکی از این موارد بوده که از قارچ رشته‌ای ES1 Aspergillus clavatus تخلیص و خواص بیوشیمیایی آن بررسی گردیده و مشخص شد که این پپتید دارای خواص منحصر بفردی می‌باشد. هدف این مطالعه، بیان ژن مولد پپتید AcAMP در باکتری E. coli و بررسی تیتر آنتی بادی آن در موش می‌باشد. روش کار: در این مطالعه تجربی ژن مولد پپتید AcAMP با جایگاه‌های آنزیمی BamHI و SalI از پلاسمید pUC57 با استفاده از PCR، تکثیر و در وکتور بیانی pET28a(+) همسانه‌سازی و به باکتری اشریشیا کولی سویه BL21(DE3) تراریخت شد. بیان پروتئین نوترکیب AcAMP با IPTG القاء و به وسیله کروماتوگرافی تمایلی نیکل تخلیص گردید. به منظور تأیید پروتئین نوترکیب western blotting انجام گرفت. موش‌ها به صورت صفاقی با پروتئین تخلیص شده ایمن شدند و تیتر IgG سرم به روش ELISA مورد سنجش قرار گرفت. یافته‌ها: عمل همسانه‌سازی در وکتور بیانی pET28a(+) به وسیله واکنش PCR و توالی یابی تائید گردید. پروتئین نوترکیب 9 کیلودالتونی تولید شده به وسیله SDS-PAGE و لکه‌گذاری وسترن مورد تأیید قرار گرفت. روند تولید آنتی بادی با استفاره از الایزا غیر مستقیم نشان دهنده ی روند افزایشی آنتی بادی مخصوصاً پس از تزریق چهارم می‌باشد. نتیجه گیری: از پپتید AcAMP نوترکیب تخلیص شده و آنتی بادی تولید شده می‌توان در تحقیقات ضد میکروبی اعم از بررسی عملکرد ضد میکروبی پپتید نوترکیب و شناسایی پپتید در کاربرد های مختلف استفاده نمود.