بررسی اثر مایع آمنیوتیک انسانی بر بقا و تکثیر رده‌های سلولی میلومای انسانی RPMI8226 و U266 در مقایسه با سرم جنین گاوی

Abstract

strongspan style=color:#0070C0;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt;زمینه و هدف: /span/span/span/strongspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt;بیماری مالتیپل میلوما یک بدخیمی مربوط به پلاسماسل می‌باشد. از آنجا که مطالعه‌ی مکانیسم‌های بیماری‌زایی و مسیرهای پیام رسان دخیل در سلول‌های عامل ایجاد بیماری در محیط آزمایشگاهی و نزدیک به محیط فیزیولوژیک بدن مهم می‌باشد؛ بنابراین بهترین محیط برای مطالعه‌ی سلول‌ها در محیط آزمایشگاهی، محیطی با بیشترین شباهت به محیط فیزیولوژیک بدن می‌باشد. این در حالی است که استفاده از سرم جنین گاوی (/span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;FBS/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt;) به عنوان مکمل رشد سلول‌ها در فرآیند کشت سلولی بسیار رایج می‌باشد؛ بنابراین هدف این مطالعه تاثیر مایع آمنیوتیک در تکثیر (/span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;Ki-67/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt; و /span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;Cyclin-D/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt;) و بقاء (/span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;Bax/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt; و /span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;Bcl2/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt;) دو رده میلومایی /span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;RPMI8226/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt; و /span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;U266/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt; در مقایسه با سرم جنین گاوی می‌باشد./span/span/spanbr strongspan style=color:#0070C0;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt;روش کار:/span/span/span/strongspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt; مایع آمنیوتیک انسانی از 6 خانم باردار در حین عمل سزارین و بصورت استریل جمع‌آوری شد. پس از کشت رده‌های سلولی میلوما (/span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;RPMI8226/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt; و /span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;U266/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt;)، تیمار رده‌های سلولی در چهار گروه با نسبت‌های متفاوت مایع آمنیوتیک انجام شد. 48 و 96 ساعت پس از تیمار، شمارش سلولی و بررسی حیات سلول‌ها با استفاده تریپان بلو و لام نئوبار انجام گرفت. هم چنین تست /span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;MTT/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt; جهت بررسی زنده/span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;shy;/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt;مانی سلول‌های میلومایی تیمار شده انجام گرفت و در نهایت میزان بیان ژن/span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;shy;/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt;های /span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;Ki67/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt;، /span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;Cyclin-D1/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt;، /span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;Bax/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt; و /span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;Bcl-2/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt; توسط تکنیک /span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;Real time PCR/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt; و به روش /span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;SYBR Green/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt; مورد ارزیابی واقع شد./span/span/spanbr strongspan style=color:#0070C0;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt;یافته‌ها:/span/span/span/strongspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt; بررسی میزان بیان ژنshy;های دخیل در فرآیند تکثیر و آپوپتوز سلولی نشان داد که در گروه‌های مورد مطالعه تحت تیمار با مایع آمنیوتیک، افزایش معنادار بیان ژن های /span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;Ki-67/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt;، /span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;Cyclin-D1/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt; و همچنین افزایش بیان ژن آنتی آپوپتوتیک /span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;bcl-2/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt; و در مقابل کاهش معنادار بیان ژن مسئول آپوپتوز، /span/span/spanspan dir=LTRspan style=color:black;span style=font-family:times new roman,serif;span style=font-size:10.0pt;Bax/span/span/span/spanspan style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt; مشاهده شد. داده‌های ما نشان می‌دهد مایع آمنیوتیک به عنوان یک منبع مغذی می‌تواند رشد و تکثیر سلول ها را تا 96 ساعت به صورت معناداری نسبت به سرم جنین گاوی افزایش دهد، هرچند که میزان تکثیر و بقای سلولی در 48 ساعت نسبت به 96 ساعت پس از کشت بیشتر می‌باشد./span/span/spanbr strongspan style=color:#0070C0;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt;نتیجه‌گیری:/span/span/span/strong span style=color:black;span style=font-family:b mitra;span style=font-size:10.0pt;بنا بر یافته‌های این مطالعه می‌توان از مایع آمنیوتیک به عنوان حامی رشد به عنوان جایگزینی برای سرم جنین گاوی تا 96 ساعت استفاده نمود. در این مطالعه تاثیر این مایع بر دو رده سلولی میلومایی ارزیابی گردید که به نظر می‌رسد بهتر است برای نتیجه‌گیری جامع‌تر در این مورد بر سلول‌های دیگر نیز مورد آزمون واقع شود./span/span/spanbr nbsp;