بررسی مورفولوژی و ایمونوفنوتیپ سلولهای بنیادی مزانشیمی بعد از تعویض سرم گاوی محیط کشت به سرم انسانی

Abstract

مقدمه: سلولهای بنیادی مزانشیمی ( MSC ) برای مقاصد سلول درمانی مورد استفاده قرار می گیرند. سرم جنین گاوی (FBS) برای رشد سلولهای بنیادی در محیط کشت ضروری می باشد. از آنجائیکه ممکن است FBS واکنشهای ایمونولو‍یک را در افراد گیرنده MSC تحریک کند و یا باعث انتقال عوامل پاتو‍ژن‍یک گردد. لذا در موارد بالینی بایستی FBS از سلولها حذف گردد. این مطالعه مشخصات سیتولوژیک و فلوسیتومتریک سلولهای بنیادی مشتق از چربی( ASCs) را در مدیومهای حاوی FBS، سرم انسانی و جایگزینی FBS با سرم انسانی و برعکس مورد ارزیابی قرار خواهد داد. مواد و روشها: سلولهای بنیادی مشتق از چربی بعد از جداسازی کشت داده شدند. جهت بررسی سیتولوژیک سلولهای پاساژ دوم بر روی لامل کشت داده شدند و بعد از فیکساسیون با هماتوکسیلین و ائوزین رنگ شدند. سلولهای پاساژ دوم با آنتی بادی های CD44 و CD90 رنگ آمیزی

زمینه و هدف: سلول‌های بنیادی مزانشیمی (Mesenchymal Stem Cells-MSC) برای مقاصد سلول درمانی مورد استفاده قرار می‌گیرند. سرم جنین گاوی (Fetal Bovine Serum-FBS) برای رشد سلول‌های بنیادی در محیط کشت ضروری می‌باشد. از آنجایی که ممکن است FBS واکنش‌های ایمونولوژیک را در افراد گیرنده MSC تحریک کند و یا باعث انتقال عوامل پاتوژنیک گردد، لذا در موارد بالینی بایستی FBS از سلول‌ها حذف گردد و با سرم انسانی جایگزین گردد. این مطالعه مشخصات سیتولوژیک و فلوسیتومتریک سلول‌های بنیادی مشتق از چربی (ASCs- Adipose Tissue Stem Cells) را در مدیوم‌های حاوی FBS، سرم انسانی و جایگزینی FBS با سرم انسانی و برعکس مورد ارزیابی قرار داده است.

روش­ کار: سلول های بنیادی مشتق از چربی بعد از جداسازی کشت داده شدند. جهت بررسی سیتولوژیک سلول‌های پاساژ دوم بر روی لامل کشت داده و بعد از فیکساسیون با هماتوکسیلین و ائوزین رنگ شدند. سلول‌های پاساژ دوم با آنتی بادی‌ها مثبت و منفیCD44 ، CD90 برای سلول‌های بنیادی، CD45 و CD11 رنگ آمیزی شده و مورد ارزیابی قرار گرفتند.

یافته ­ها: سلول‌های بنیادی تکثیر یافته در FBS شکل پهنی داشته و به کندی تکثیر پیدا کردند در حالی که سلول‌های دارای سرم انسانی دوکی شکل بود و به سرعت رشد می‌کردند. تعویض سرم از FBS به سرم انسانی باعث تغییر شکل سلول‌ها از پهن به دوکی گردید. در نتایج forward scatter سلول‌های بنیادی کشت داده شده در FBS به طور معنی‌داری بزرگ‌تر از سایر گروه‌ها بودند (05/0 p<). تفاوت معنی داری در بیان مارکرهای ایمونوفنوتیپیک مثبت و منفی مشاهده نشد.

نتیجه­ گیری: نتایج این مطالعه نشان دهنده این است که سرم انسانی، شرایط کشت سلول‌های بنیادی مزانشیمی را در مقایسه با مدیوم حاوی FBS قابل دسترس تجاری ، بهبود می‌بخشد. تعویض FBS به سرم انسانی روش مفید برای سلول‌های بنیادی خواهد بود که قبلاً در FBS کشت داده شده و یا فریز گردیده‌اند.

ده و مورد ارزیابی قرار گرفتند. نتایج: سلولهای بنیادی تکثیر یافته در FBS شکل پهنی داشته و به کندی تکثیر پیدا کردند در حالیکه سلولهای دارای سرم انسانی دوکی شکل بود و به سرعت رشد می کردند. تعویض سرم از FBS به سرم انسانی باعث تغییر شکل سلولها از پهن به دوکی گردید. در نتایج forward scatter سلولهای بنیادی کشت داده شده در FBS بطور معنی داری بزرگتر از سایر گروهها بودند(p<0.05). تفاوت معنی داری در بیان مارکرهای ایمونوفنوتیپیک مثل CD44, CD90 مشاهده نشد. نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشاندهنده این است که سرم انسانی، شرایط کشت سلولهای بنیادی مزانشیمی را در مقایسه با مدیوم حاوی FBS قابل دسترس تجاری، بهبود می بخشد. تعویض FBS به سرم انسانی روش مفید برای سلولهای بنیادی خواهد بود که قبلاً در FBS کشت داده شده و یا فریز گردیده اند.