بیان کاست ژنی SO6-STxB در باکتری اشرشیا کلی و بررسی تیترآنتی‌بادی

Abstract

زمینه و هدف: یکی از راه­های تقویت اثر واکسن­ها استفاده از یاور­ها می­باشد. STxB باکتری شیگلا دارای نقش یاوری و حاملی بوده و می­توان با ترکیب کردن آنتی­ژن­های کاندیدای واکسن با این یاور به تولید واکسن مناسب پرداخت. غاسول صابونی گیاهی دارای فعالیت ان-گلیکوزیداز می­باشد. ایزوفرم 6 این گیاه (SO6)، آدنین 4324 را در توالی حفاظت شده GAGA در 28SrRNA پورین­زدایی کرده و سنتز پروتئین را مختل می­کند. هدف این مطالعه، بیان ژن SO6-STxB در باکتری اشرشیا کلی و بررسی تیتر آنتی‌بادی آن در موش می­باشد. روش کار: در این مطالعه تجربی ژن SO6 با جایگاه­های آنزیمی BamHI و SalI از پلاسمید pUC57 جداسازی گردید و در وکتور بیانی pET28a(+) حاوی ژن STxB زیرهمسانه­سازی و به باکتری اشرشیا کلی سویه BL21(DE3) تراریخت شد. بیان پروتئین نوترکیب SO6-STxB توسط IPTG القا و تخلیص به وسیله کروماتوگرافی تمایلی ستون نیکل انجام گردید. تأیید پروتئین نوترکیب با استفاده از وسترن بلات انجام گرفت. موش­‌ها به صورت صفاقی با پروتئین تخلیص شده واکسینه شدند و تیتر IgG سرم به روش ELISA مورد سنجش قرار گرفت. یافته­ها: زیرهمسانه­سازی ژن STxB-SO6 در­­ وکتور بیانی pET28a(+) به‌وسیله واکنش PCR و هضم آنزیمی، تائید شد. پروتئین نوترکیب 5/37 کیلودالتونی تولید شده به وسیله SDS-PAGE و لکه­گذاری وسترن تأیید شد. سپس آنتی­بادی تولید شده از سرم موش جداسازی و توسط الایزا اندازه‌گیری گردید. نتیجه­گیری: آنتی­ژن STxB-SO6 نوترکیب تخلیص شده می­تواند برای تحقیقات ضد سرطانی و کاندید واکسن استفاده شود.