مطالعه بیان ژن ureI هلیکوباکترپیلوری به روش RT-PCR

Abstract

سابقه و هدف: هلیکوباکترپیلوری یک ارگانیسم مارپیچی شکل و گرم منفی بوده که عامل زخم معده است و نقش مهمی در ایجاد سرطان معده دارد. اجزای مختلف اوره آز، از عوامل مهم برای تحریک سیستم ایمنی هستند. هنوز واکسن موثری علیه این باکتری وجود ندارد و تحقیقات در زمینه یافتن واکسن، ضروری به نظر می رسد. هدف از تحقیق حاضر، ایجاد سازواره ژنی بر اساس ژن ureI و بررسی بیان آن است.

مواد و روش­ها: در این مطالعه تجربی، تکثیر ژن ureI با انجام PCR روی ژنوم سویه استاندارد هلیکوباکترپیلوری تهیه شده از موسسه پاستور، صورت پذیرفت. قطعه 612 جفت بازی مربوط به ureI به روش T/A cloning در پلاسمید pTZ کلون گردید، سپس ساب کلونینگ این ژن در پلاسمید PIRES2-EGFP انجام شد. سازواره PIRES2-EGFP-ureI به روش الکتروپوریشن به سلول های جانوری CHO منتقل و بیان یوکاریوتی ژن ureI با تکنیک RT-PCR بررسی گردید.

یافته­ ها: کلونینگ قطعه 612 جفت بازی ژن ureI در دو ناقل pTZ و PIRES2-EGFP با استفاده از تکنیک های PCR، هضم آنزیمی توسط SacI و EcoRI و تعیین توالی تایید گردید. پس از انجام RT-PCR روی سلول های CHO ترانسفرم شده، باند مربوط به ژن ureI تشکیل شد.

نتیجه­ گیری: وکتور نوترکیب PIRES2-EGFP-ureI، قدرت بیان ژن ureI را دارد. بیان موفق این ژن در سلول های جانوری، می تواند در جهت بررسی ایمنی زایی در حیوانات آزمایشگاهی به عنوان یک واکسن نوترکیب مد نظر قرار گیرد.