ارزیابی بیان نوترکیب زنجیره سبک توکسین بوتولینوم تیپ ‌A‌ متصل به یک پپتید ‌ نفوذ کننده به سلول ‌

Abstract

سابقه و هدف: توکسین بوتولینوم تیپ A امروزه به طور گسترده ای به صورت تزریقی در درمان برخی اختلالات انقباضی ماهیچه‌هابه کار می رود.این مطالعه به منظور تولیدپروتئین نوترکیب حاصل از اتصال کوالان زنجیره سبک توکسین بوتولینوم تیپ A (BoNT/A) به پپتید TAT(47-57)وهمچنین شرایط مناسببرای افزایشبیان و تخلیص این پروتئین انجام شد.

مواد و روش­ ها:در این مطالعه بنیادی توالی نوکلئوتیدی زنجیره سبک توکسین بوتولینوم تیپ A و پپتید TATاز بانک‌ ژنی به دست آمد وسازه ژنی حاوی اینتوالی‌هاطراحی و ساخته شد. پس از کلون سازی در وکتور بیانی BL21 (DE3)E. coli القای بیان با استفاده از IPTG انجام گرفت.سپس شرایط بهینه دمایی و غلظت مناسب IPTGبرای بیشترین میزان بیان بر اساس تفاوت در شدت رنگ میان باندهای پروتئینی ژل درSDS PAGEتعیین شد. پروتئین نوترکیببا کمک ستون کروماتوگرافی حاوی نیکل (Ni-NTA) تخلیصشد.

یافته ها: پروتئین کایمریک حاصل در شرایط معمول بیان (mM IPTG 1و دمای C˚37) به صورت نامحلول تولید می شود. با بهینه سازی شرایط بیان (mM IPTG 5/0و دمای C˚18)میزان 60% ازپروتئین کایمریک به صورت محلول تولید شد.

نتیجه گیری: بر اساس نتایج این مطالعه با بیان پروتئین نوترکیب به صورت محلول پروتئین پیچش صحیح و در نتیجه فعالیت خود را به میزان زیادی حفظ کرده و نیازی به استفاده از ترکیبات دناتوره کننده برای باز کردن پیچش پروتئین و محلول سازی آن نخواهد بود.