بررسی اثر حمایتی لایه های مختلف تغذیه کننده بر روی سلول های بنیادی جنینی موش

Abstract

سابقه و هدف: کاربرد سلول های بنیادی در تحقیقات پزشکی و درمان افق جدیدی در بهبود بسیاری از بیماری ها ایجاد کرده است. لذا روش هایی که موجب جداسازی، کشت و نگاهداری بهتر این سلولها گردد، دارای اهمیت ویژه ای می باشد. هدف از این تحقیق بررسی اثر حمایتی سه لایه تغذیه کننده سلول های فیبروبلاستی جنینی (MEF)، سلول های بنیادی مزانشیمی (MSC) و رده سلولی 3T3 در جداسازی و کشت سلول های بنیادی جنینی جهت افزایش بقا و تعداد سلول ها می باشد. مواد و روشها: جهت تهیه سلول های بنیادی جنینی از موش نژاد Balb/c بلاستوسیست گرفته شد. سلولها بر روی لایه های MEF، MSC و3T3 قرار داده شد. 2 تا 3روز بعد سلولها از زونا پلوسیدا خارج شدند و 5 روز پس از رشد توده سلولی داخلی، توده های مذکور تریپسینه و به خوشه های کوچک چند سلولی تبدیل شدند. سپس کلونی های تشکیل شده بر روی هر لایه کشت شدند. در نهایت کلونی ها از نظر تعداد و ویژگی های مورفولوژیکی با استفاده از رنگ آمیزی آلکالین فسفاتاز مقایسه شدند. یافته ها: از 29 جنین قرار داده بر روی لایهMEF همگی به لایه مذکور متصل شدند و همگی (100%) خروج از لایه زونا و رشد را انجام دادند. از 32 جنین بر روی لایه MSC (شصت و جهار ممیز پنج دهم درصد) چسبیده و رشد کردند. اتصال 20 جنین روی لایه 3T3 اتصالی کم بود و هیچ کدام به مرحله رشد توده سلولی داخلی نرسیدند. نسبت درصد خروج از زونا و میزان زنده ماندن بلاستوسیست ها بر روی سه لایه اختلاف معنی داری را نشان داد (05/0>p) بطوریکه بیشترین نتیجه و نقش حمایتی مربوط به لایه MEF بود. نتیجه گیری: نتایج این 3 لایه تغذیه کننده سلولهای بنیادی جنینی نشان داد که لایه MEF از MSC بهتر و هر دو نسبت به لایه 3T3 در حمایت و پشتیبانی سلولهای بنیادی برتری دارند.