تولید پروتئین نوترکیب سیالیداز-کمپ و تهیه نانوذرات کایتوزان حامل آن به منظور استفاده بعنوان کاندیدای واکسن پروپیونی باکتریوم آکنه

Abstract

سابقه و هدف: آکنه ولگاریس یکی از شایع­ترین بیماری­های پوستی است که فشار روحی زیاد و هزینه بالایی برای بیماران دارد. درمان­های موجود کارایی پایینی داشته و شامل آنتی بیوتیک ها و داروهای ضدالتهابی هستند که با توجه به ماهیت مزمن بیماری بویژه در سنین جوانی، عوارض زیادی از جمله مقاومت آنتی­بیوتیکی و واکنش­های آلرژیک دارند. به همین دلیل یکی از رویکردهای جدید درمانی، استفاده از واکسن درمانی با کمک خود باکتری و یا اجزای آن است. هدف از این مطالعه تولید نانوذرات حامل پروتئین نوترکیب CAMP-Sialidase به عنوان یک آنتی­ژن کایمریک جدید برای استفاده در واکسن درمانی بیماری اکنه می­باشد. مواد و روش­ ها: جهت بیان پروتئین نوترکیب CAMP-Sialidase از میزبان E. coli BL21 DE3 استفاده شد. تخلیص پروتئین به روش ترکیبی اوره-ایمیدازول و با استفاده از ستون نیکل-نیتریلو استیک اسید انجام شد. پروتئین نوترکیب با روش وسترن بلاتینگ با آنتی­بادی ضد هیستیدین مورد تایید قرار گرفت. سپس نانوذرات بارگذاری شده با پروتئین نوترکیب به روش ژلاسیون یونی کایتوزان با تری­پلی­فسفات تهیه شدند. در نهایت اندازه و پتانسیل زتای نانوذرات با دستگاه DLS تعیین گردید. یافته ها: پس از بیان و تخلیص، پروتئین نوترکیب CAMP-Sialidase مورد تایید قرار گرفت. اندازه و پتاسیل زتای نانوذرات حاوی پروتئین نوترکیب CAMP-Sialidase با غلظت 0/6 میلی­گرم بر میلی­لیتر از طریق دستگاه DLS بترتیب 80 نانومتر و 27+ میلی ولت تعیین گردید. میزان بارگذاری پروتئین در نانوذرات 88 درصد تعیین شد. نتیجه گیری: نتایج نشان می­دهد که پروتئین نوترکیب بصورت کاملا سالم بیان شده و بطور موفقیت­آمیزی در داخل نانوذرات کایتوزان کپسوله شده است.