تهیه یک لیگاند حساس به نور برای گیرنده‌های برادی کنین

Abstract

چکیده برادی کنین با اثر بر روی گیرنده های B2 مسئول اکثر اثرات فیزیولوژیکی آن میباشد. تاکنون تهیه یک کونژوگه برادی کنین فعال شونده با نور که میل ترکیبی گیرنده‌های برادی کنین B2 بصورت محلول را داشته باشد گزارش نشده است. با رادیو اکتیو کردن این کونژوگه‌ها میتوان از آنها جهت نشاندار کردن گیرنده‌ها استفاده کرد. گیرنده‌های رادیو اکتیو در مراحل خالص سازی بسیار مفید هستند. ‌هدف این مطالعه تهیه یک لیگاند برادی کنین فعال شونده با نور است که قابلیت ترکیب با گیرنده‌های برادی کنین B2 را دارد. در این مطالعه تجربی جهت کونژوگاسیون با لایزیل برادی کنین (یکی از آنالوگهای برادی کنین) از Sulfosuccimidy1 (p - azidosalicylamido ) ethyl - 1 , 3 - dithiopropionate ( SASD)-2 استفاده شد. پس از ۱۸ ساعت انکوباسیون SASD با LBKدر نور بی خطر (نور قرمز با لامپ ۲۵ وات) کونژوگه SASD - LBK بدست آمد. آزمایشات HPLC نشان داد که زمان نگهداری کونژوگه در ستون HPLC ۲6دقیقه بود. و این با زمان نگهداری مواد شروع کننده واکنش LBK (۱۷دقیقه) و SASD (24دقیقه) متفاوت بود. همچنین آزمایشات مهار اتصال آنتی بادی علیه برادی کنین به پلیتهای لعاب داده شده با glut - BSA LBK نشان داد که کونژوگه تهیه شده در مقایسه با SASD و LBK فعالیت ایمنولوژیکی خود را حفظ کرده است. آزمایشات پیوند با گیرنده محلول (soluble binding assay) نشان دادند که کونژوگه SASD LBK - با گیرنده‌های برادی کنین B2 در میومتر رحم گاو که بصورت محلول در آمده است میل ترکیبی دارد. ‌با اضافه کردن I125 به کونژوگه میتوان از آن برای رادیو اکتیو کردن گیرنده استفاده کرد. بدین ترتیب که ابتدا کونژوگه رادیو اکتیو به گیرنده بصورت محلول در آمده متصل می‌شود، پس از آن با تابیدن نور یک پیوند کووالانسی بین گیرنده و لیکاند ایجاد میشود. بدین ترتیب میتوان مراحل مختلف خالص سازی گیرنده را با دنبال کردن رادیو اکتیویته پیگیری کرد.