کلون‌سازی و بررسی بیان ژن ureG به عنوان کاندیدای واکسن ژنی علیه هلیکوباکتر‌‌پیلوری

Abstract

مقدمه: هلیکوباکتر پیلوری، نوعی باکتری گرم منفی است که جمعیت زیادی از جوامع انسانی را در سراسر جهان دچار کرده است. اوره‌آز هلیکوباکتر‌پیلوری برای بقای آن در معده‌ی انسان ضروری است و ژن ureG یکی از مهم‌ترین عوامل مهم بیماریزایی آن است. هدف: کلون‌سازی ژن ureG برای ایجاد واکسن ژنی علیه هلیکوباکتر‌پیلوری مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی، نخست از هلیکوباکتر‌پیلوری DNA استخراج شد. تکثیر ژن ureG با استفاده از پرایمرهای ویژه این ژن انجام و فراورده PCR به روش کلون‌سازی T/A در وکتور pTZ وارد شد. سپس، ژن ureG از درون وکتور pTZ با آنزیم‌های‌XbaI و SalI برش داده شد و در وکتور بیانی pCI-neo، ساب‌کلون شد. وکتور نوترکیب pCI-neo-ureG را به روش الکتروپوریشن وارد سلول CHO کرده و بیان ژن ureG بر ژل SDS-PAGE مشاهده شد. نتایج: تکثیر و جداسازی ژن ureG هلیکوباکتر‌پیلوری به روش PCR با موفقیت انجام شد. نتایج نشان داد ژن ureG به ترتیب در وکتورهای pTZ و pCI-neo به درستی کلون شده و سازواره فرجامین(نهایی) pCI-neo-ureG تولید شده‌است. نتیجه وارد سازی سازواره نهایی در سلول CHO نیز نشان دهنده بیان و ایجاد یک باند 23 کیلودالتونی روی ژل SDS-PAGE بوده است. نتیجه‌گیری: ژن ureG کلون‌سازی شده در وکتور بیانی pCI-neo توانایی بیان و تولید فرآورده پروتئینی اختصاصی این ژن در سلول جانوری CHO را دارد. بنابراین، این سازواره ژنی را می‌توان به عنوان کاندیدای مناسبی برای بررسی‌های بعدی در مورد واکسن‌های نوترکیب علیه هلیکوباکتر‌پیلوری در الگوی حیوانی شناساند.