طراحی و بهینه‌سازی سیستم الایزای نقطه‌ای (Dot-blot ELISA) با آنتی‌ژن‌های اختصاصی برای تشخیص ساده و سریع مشمشه

Abstract

مقدمه مشمشه از قدیمی‌ترین بیماری‌های واگیر خطرناک و مشترک بین انسان و حیوان است که با ظهور جراحات گرانولوماتوزی قرحه‌ای در پوست و غشاهای مخاطی مشخص می‌شود. با توجه به گزارش حتی یک مورد بیماری و لزوم جلوگیری از انتشار آن با شناسایی و معدوم‌سازی میزبان‌های آلوده، شناسایی زودهنگام بیماری با روش‌های حائز حساسیت و ویژگی قابل قبول، از اهمیت بالایی برخوردار است. مطالعۀ حاضر به ‌منظور طراحی و بهینه‌سازی سیستم الایزای نقطه‌ای (Dot-blot ELISA) با آنتی‌ژن‌های اختصاصی جهت تشخیص ساده و سریع مشمشه در نمونه‌های سرمی اسب‌سانان انجام گرفت. مواد و روش‌ها سویه‌های بورخولدریا مالئی در محیط مایع نوترینت همراه با گلیسیرول 4 درصد کشت داده شدند. آنتی‌ژن‌های کل سلول باکتری با استفاده از روش سونیکاسیون و ترسیب با تری‌کلرو استیک اسید (TCA) استخراج شد. غلظت بهینه آنتی‌ژن-آنتی‌بادی با روش تیتراسیون چکر بورد معین شد. آنتی‌ژن باکتری روی کاغذ نیتروسلولز مفروش و بعد از متوقف‌سازی با شیرخشک، سرم حیوان مشکوک و سپس آنتی‌بادی کونژوگه شده با HRP اضافه گردید و با استفاده از سوبسترای TMB، سیگنال‌ها رهگیری شد. یافته‌ها تعداد 4 نمونه از 90 نمونۀ سرم با استفاده از آزمون الایزای نقطه‌ای، مثبت گزارش شد. ویژگی و حساسیت آزمون، به‌ترتیب 96/62 و 100 درصد برآورد گردید. کشت و جداسازی بورخولدریا مالئی از نمونه‌های بالینی حیوان، اعتبار تست را تایید کرد. نتیجه‌گیری یافته­‌ها نشان داد روش الایزای نقطه‌ای حائز حساسیت، ویژگی و دقت بالا در تشخیص مشمشه بوده و به‌ دلیل سرعت، سهولت تفسیر بدون نیاز به ابزار خاص، مقرون به‌صرفه بودن و قابلیت کاربردی صحرایی آن، روش کاربردی و کارآمد می­‌باشد.