بررسی تخمیر، جداسازی و شناسایی سیکلوسپورین A با کاربرد ژل کروماتوگرافی، روش ضد قارچی و طیف سنجی

Abstract

های مناسب مرطوب یا جامد محتوی عصاره مالت و در حرارت بین 6-30°C رشد می نمایند، سیکلوسپورین ها از متابولیت های قارچ ماکرولیدی می باشند. مهمترین اثر درمانی سیکلوسپورین A، تضعیف سیستم ایمنی و تشکیل آنتی بادی در رد کردن پیوند اعضا می باشد. هدف این تحقیق، افزایش تولید سیکلوسپورین A به روش جهش، توسط اشعه ماورای بنفش و فراهم کردن محیط کشت برای اگزوتروف های به دست آمده است. مواد و روش ها: 915DSM) Tolypocladium)، محیط کشت عصاره مالت و سابورد دکستروز 4 درصد، با کتوپیتامین، کازئین هیدرولاز و عصاره مخمر دهیدراته شدند. قارچ روی محیط جامد محتوی 2% عصاره مالت، 4% عصاره مخمر و 2% آگار دکستروز در pH=7.5 کشت و در حرارت 24°C نگهداری شد. استخراج سیکلوسپورین ها پس از سونیکیت کردن توسط ژل کروماتوگرافی انجام گرفت. برای افزایش تولید سیکلوسپورین A جهش با اشعه فرابنفش و برای ردیابی، از روش اسپکتروفتومتری فرابنفش، تحت قرمز و روش ضد قارچی استفاده گردید. یافته ها: حاصل کشت روی محیط آگار-عصاره مالت در حرارت 24°C، کلنی های سفید مخملی بود. نمونه ها و فراکسیون های جدا شده با ژل کروماتوگرافی دارای اثر ضد قارچی روی آسپرژیلوس نیجر بودند. طیف سنجی با اشعه فرابنفش مرئی، حداکثر جذب (مطابق 230nmتا220 ?Max) مشابه استاندارد نشان داد و طیف فروقرمز نیز مطابق با طیف استاندارد سیکلوسپورین A بود. نتیجه گیری: آکزوتروف های حاصل از موتاسیون قارچ، در محیط های صناعی و محیط خام کشت شدند. بهترین کشت و تولید با استفاده از عصاره مالت همراه با پس آب کارخانه روغن کشی از ذرت در تاریکی امکان پذیر است.