شناسایی اپی توپهای سلولهای CD4+ T در پروتئین ترشحی MPB51 مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در موشهای C57BL/6

Abstract

مقدمه و هدف: سلولها T کمکی نوع یک (Th1) و لنفوسیتهای CD8+T نقش بسزایی در برقراری حفاظت مقابل عفونت به مایکوباکتریوم توبرکلوزیس دارند. واکسیناسیون با MPB51 موجب بروز پاسخهای سلولی Th1 و برقراری حفاظت در مدلهای حیوانی توبرکلوزیس می شود. هدف از این مطالعه شناسایی اپی توپهای غالب لنفوسیتهای T از مولکول MPB51 در موشهای C57BL/6 می باشد.

روش کار : DNA کدکننده مولکول MPB51 ابتدا در پلاسمیدهای pCI کلون گردید. پس از ایجاد گلوله های ژنی حاوی ذرات طلای پوشیده شده از ژن MPB51، با استفاده از تفنگ ژنی (Gene gun) موشهای نژاد C57BL/6 واکسیناسیون شدند. دو هفته بعد از آخرین ایمن سازی سلولهای طحالی استخراج شد و در پلیتهای کشت سلولی در حضور یا عدم حضور کتابخانه ای از پپتیدهای هم پوشان سنتتیک حاوی توالی کامل مولکول MPB51 در محیط کشت RPMI1640 حاوی 10% FCS کشت داده شد. تولید داخل سلولیIFN-&upsih و سوپ کشت سلولی به ترتیب با روش فلوسیتومتری و ELISA بررسی گردید.

نتایج : تعیین نقشه اپی توپهای سلول T طحالی با تحریک مجدد با پپتید های ساختگی 20 اسید آمینه ای کل مولکول نشان داد که واکسیناسیون DNA باعث ایجاد پاسخ ایمنی در برابر پپتید های 190-P171 و P191-210 می شود. آنالیزهای بیشتر با استفاده از حذف دستجات سلولهای T و آنالیز رقت نشان داد آپی توپهای P171 و P191 به ترتیب اپی توپ غالب و نیمه غالب سلول CD4+T محدود به مولکولهای H2-Ab محسوب می شود.

نتیجه نهائی: واکسیناسیون با DNA پلاسمیدی حاوی مولکول MPB51 علاوه بر آنکه موجب ایجاد پاسخهای اختصاصی سلولهای CD4+T می گردد، روش مناسبی برای شناسایی پپتید های ایمونوژن می باشد.