جداسازی و کشت اولیه هپاتوسیت های کبد رت با استفاده از آنزیم اکتینیدین میوه کیوی

Abstract

مقدمه و هدف: برای تجزیه ماتریکس خارج سلولی، جداسازی و کشت اولیه سلول ها، از آنزیم های پروتئولیتیک، بخصوص کلاژناز برای هضم بافت استفاده می شود. یافتن پروتئاز جایگزین کلاژنازهای باکتریایی یا جانوری در منابع گیاهی که راحتر و کم هزینه تر تخلیص گردد، از اهمیت ویژه ای برخوردار است. در مطالعه حاضر از آنزیم اکتینیدین که به وفور در میوه کیوی یافت می شود، برای جداسازی و کشت هپاتوسیت های کبد موش صحرایی استفاده شد.

روش کار: در این مطالعه تجربی آنزیم اکتینیدین پس از تخلیص، در غلظتهای مختلف با روش پرفیوژن یک و دومرحله ای برای جداسازی هپاتوسیت ها از کبد موش صحرایی بکار برده شد. هپاتوسیت های جدا شده در پلیت های کلاژن دار در محیط کشت ویلیامز- ای کشت داده شدند. درصد زنده بودن سلول های جداشده با استفاده از آزمون تریپان بلو و مورفولوژی سلول ها در مراحل کشت پس از رنگ آمیزی با روش پاپانیکولا بررسی شد.

نتایج: اکتینیدین با غلظت 0.4 میلی گرم در میلی لیتر در روش پرفیوژن دومرحله ای توانست بطور مناسب هپاتوسیت ها را از کبد موش جدا نماید. درصد سلول های جدا شده 95-90 درصد تخمین زده شد. سلول ها پس از کشت درپلیت های حاوی کلاژن مرفولوژی هپاتوسیت را به وضوح نشان دادند.

نتیجه نهایی: این نتایج نشان داد که اکتینیدین پروتئاز مناسبی برای جداسازی هپاتوسیت ها از کبد است. بعلاوه، تخلیص اکتینیدین در مقایسه با کلاژنازها ساده تر و کم هزینه تر است.