کلونینگ و بیان پروتئین فاکتور رشد جفتی-1 انسانی (hPLGF-1) در سیستم بیانی Rosetta E.coli

Abstract

سابقه و هدف: آنژیوژنزیس یا شکل گیری عروق خونی جدید در شرایط فیزیولوژیک و پاتولوژیک مهم ترین عامل رشد و تکثیر سلول ها است. پروتئین PLGFیا فاکتور رشد جفتی یکی از مهم ترین پروتئین ها در تحریک آنژیوژنزیس است. در این پژوهش، ژن PLGF-1 انسانی از بافت جفت جدا شده و پروتئین مورد نظر در سیستم باکتریایی بیان شد. روش بررسی: دراین مطالعه تجربی، ناحیه کد کننده ژن PLGF-1 از بافت جفت انسان توسط پرایمرهای اختصاصی تکثیر شد. قطعه ژنی مورد نظر در پلاسمیدهای pET28a و pET32a کلون شد. پلاسمیدهای نوترکیب pET28a-PLGF-1 و pET32a-PLGF-1 به باکتری E.coli Rosetta منتقل شدند و بیان پروتئین نوترکیب توسطIPTG القاء گردید. بیان پروتئین نوترکیب و محلولیت آن با SDS-PAGE بررسی و با روش وسترن بلاتینگ هویت آن تائید شد. یافته ها: مراحل طراحی و ساخت سازه ژنی pET28a-PLGF-1 و pET32a-PLGF-1 با موفقیت انجام و توالی ژن PLGF-1 تأیید گردید. باکتریهای القاء شده با IPTG پروتئین PLGF-1 را بیان کردند و توسط وسترن بلاتینگ به تایید رسید. همچنین پروتئین نوترکیب PLGF-1 تقریبا به صورت نامحلول بیان شد. نتیجه گیری: پروتئین PLGF-1 به خوبی در سیستم بیانی RosettaE.coliبیان می‌شود و می‌توان از این پروتئین نوترکیب در تست-های مختلف استفاده نمود.