تولید و تخلیص آنتروتوکسین مقاوم به حرارت یرسینیا آنتروکلی تیکا

Abstract

یرسینیا آنتروکلیتیکا به دلیل تولید آنتروتوکسین مقاوم به حرارت (ST) مشابه با اشریشیاکلی، احتمالا در گروه باکتریهای توکسینوژن طبقه بندی می شود. کشت فیلتر شده یرسینیا آنتروکلیتیکا قادر به فعال کردن گوآنیلات سیکلاز و افزایش تجمع گوآنوزین 5-3 منوفسفات حلقوی (cGMP) در روده بچه موش می شود. برای تولید آنتروتوکسین (ST)، سه سویه یرسینیا آنتروکلیتیکا (6810-6809-4052) از مجموعه انستیتو پاستور فرانسه انتخاب شد. تمام سویه ها متعلق به سروتایپ 3، بیوتایپ 4 بوده از بیماران اسهالی جدا شده بودند. پس از تهیه مقادیر مناسب آنتروتوکسین (ST) اقدام به تفکیک اجزا توکسین با استفاده از روشهای اولترافیلتراسیون، ژل فیلتراسیون، H.P.L.C و ایزوالکتروفوکالیزاسیون نمودیم. نتایج نشان داد که توکسین خالص شده دارای وزن مولکولی حدود 5000 الی 10000 دالتون می باشد. بعلاوه، ایزوالکتروفوکالیزاسیون آنتروتوکسین (ST) در یک گرادیان pH از 6/3 تا 2/5 نشان داد که این توکسین دارای دو جز تفکیکی ST1 با نقطه ایزوالکتریک Pi=3.1 و ST2 با نقطه ایزوالکتریک Pi=2.9 می باشد. بررسیهای بعدی نشان داد که دو جز تفکیکی بدست آمده دارای فعالیت یکسان بر روده بچه موشهای چند روزه هستند.