طراحی و ساخت پلاسمید نوترکیب حاوی ترکیب ژن‌های Ag85B و TB10.4 مایکوباکتریوم توبرکولوزیس

Abstract

پیش‌زمینه و هدف: علی‌رغم استفاده از واکسن ب.ث.ژ از سال 1921 تابه‌حال، هنوز بیماری سل به‌عنوان دومین عامل مرگ‌ومیر در بین بیماری‌های عفونی محسوب می‌گردد. با افزایش مقاومت عامل مولد سل (مایکوباکتریوم توبرکولوزیس) به آنتی‌بیوتیک‌های معمول و وسیع‌الطیف و همچنین با ظهور HIV و عفونت این ویروس با مایکوباکتریوم توبرکولوزیس، مقابله با این بیماری بیشتر به چالش کشیده شده است. شناخت آنتی‌ژن‌های مؤثر در ایمنی‌زایی محافظتی می‌تواند به‌عنوان کاندیدی برای طراحی واکسن‌های نوین باشد. ازجمله این آنتی‌ژن‌ها Ag85B و TB10.4 می‌باشد که با وزن مولکولی به ترتیب 30 و 10 کیلودالتون توسط لنفوسیت‌های T شناخته‌شده و سبب القاء پاسخ قوی Th1 و درنتیجه بالا بردن تولید IF-&gamma می‌گردند. هدف از این تحقیق، ساخت کاست ژنی حاصل از تلفیق دو ژن فوق در درون وکتور pcDNA3 می‌باشد.

مواد و روش‌ها: DNA متعلق به مایکوباکتریوم توبرکولوزیس سویه H37Rv به روش روتین استخراج گردید. ژنوم کدکننده این دو آنتی‌ژن توسط پرایمرهای اختصاصی به روش PCR تکثیر و سپس تلفیق گردید و پس از هضم آنزیمی درون وکتور یوکاریوتی pcDNA3 کلون گردید. پلاسمید نوترکیب فوق در باکتری E.coli DH5&alpha ترنسفورم گردید و پس از تخلیص، توسط آنالیز آنزیمی و توالی‌یابی مورد تأیید واقع شد.

یافته‌ها: نتایج تعیین توالی و آنالیز آنزیمی تأیید نمود که کلونینگ با موفقیت انجام شده است.

بحث و نتیجه‌گیری: قطعات TB10.4 و Ag85B ترکیب گردید و در وکتور pcDNA3 با موفقیت کلون گردید. در مطالعات بعدی می‌توان بیان ژن را در رده سلولی ارزیابی نمود و از این کاست ژنی به‌عنوان واکسن DNA استفاده نمود.