ارزیابی فراوانی زیرگونه‌های ژیاردیالامبلیا به روش PCR-RFLP در نمونه‌های مدفوع کودکان بستری شده در مرکز آموزش و درمانی مطهری شهر ارومیه

Abstract

پیش زمینه و هدف: ژیاردیا لامبلیا یکی از شایع‌ترین پروتوزواهای تاژکدار روده‌ای است که گروه وسیعی از میزبانان مهره‌دار را آلوده می‌کند. ژیاردیا یکی از معمول‌ترین پاتوژن‌های روده‌ای در بچه‌هاست که باعث اختلالات شدید روده‌ای و تأخیر در رشد می‌شود.این مطالعه برای تعیین زیرگونه‌های ژیاردیالامبلیا به وسیله روش PCR-RFLP با استفاده از ناحیه گلوتامات دهیدروژناز از کودکان بستری شده در بیمارستان مطهری ارومیه، آذربایجان غربی در ایران انجام گرفت.مواد و روش‌ها: در این مطالعه، 34 نمونه مدفوع از کودکان بستری شده در بیمارستان مطهری ارومیه که با استفاده از میکروسکوپ نوری دارای کیست‌های ژیاردیا بودند جمع‌آوری شد. کیست‌ها به طور نسبی به وسیله روش گرادیان سوکروز تغلیظ و سپس جهت حذف موثر مهار کننده‌های PCR، به وسیله آب مقطر استریل شستشو داده شد. DNA ژنومیک انگل ژیاردیا به وسیله سیکل‌های انجماد و ذوب کردن و سپس روش فنل کلروفرم استخراج شد. برای تمایز زیرگونه‌های A، B که در انسان‌ها یافت می‌شود یک آزمایش PCR-RFLP تک مرحله‌ای انجام گرفت. در این روش یک قطعه‌ای به اندازه432 bp مورد انتظار بود، تکثیر یافت و سپس برای تعیین زیرگروه‌های انگل، از آنزیم‌های محدود کننده اختصاصی RsaI، BspL1 استفاده شد.یافته‌ها: از 720 نمونه بررسی شده میکروسکوپی، به طور کلی 34 نمونه از نظر وجود کیست ژیاردیا مثبت بودند که میزان شیوع انگل 72/4درصد گزارش شد.آزمایش PCR-RFLP بر روی این نمونه‌ها آشکار کرد که 28 نمونه (3/93%) دارای ژنوتایپ BIII و دو نمونه (7/6%) متعلق به زیر گروه BIV می‌باشد.نتیجه گیری: PCR-RFLP یک روش قوی و قابل اعتمادی است که ما را در تعیین موثر ژنوتایپ در بین زیرگونه‌های ژیاردیا با استفاده از ژن ناحیه گلوتامات دهیدروژناز میسر ساخته و شناسایی وجود ژنوتایپ‌های مخلوط را ممکن می‌سازد. بر اساس نتایج یک منشأ حیوانی از عفونت پیشنهاد می‌شود.