تشخیص سریع حساسیت به اتامبوتول در سویه‌های مایکوباکتریوم توبرکلوزیس ایزوله شده از بیماران مسلول با روش مولکولی PCR-RFLP

Abstract

پیش زمینه و هدف: اتامبوتول یکی از داروهای کلیدی جهت درمان بیماری سل بوده و بروز مقاومت به آن به صورت فزاینده‌ای گزارش می‌شود. در مطالعه حاضر روش Polymorphism) (Restriction Fragment Length PCR-RFLP در شناسایی سریع مقاومت سویه‌های مایکوباکتریوم توبرکلوزیس نسبت به اتامبوتول مورد بررسی قرار گرفته است.روش بررسی: در این مطالعه از127 سویه مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در مرکز تحقیقات سل اراک، 60 سویه انتخاب و مورد بررسی قرار گرفتند. جداسازی DNA با استفاده از روش Chelex100انجام گردید. PCR با کمک پرایمرهای اختصاصی برای آمپلی فیکاسیون قطعه bp167 ژن embB اجرا گردید. محصول PCR با کمک آنزیم‌های HaeIII و NlaII مورد RFLP قرار گرفت و الگوی باندها تعیین شد. قطعه مورد نظر در تعدادی از نمونه‌ها تعیین ترادف (سکوئنس) شده و به‌عنوان استاندارد طلایی با روش ارائه شده مقایسه گردید.یافته‌ها: از 60 سویه مورد مطالعه، 43 سویه از نظر فنوتیپی مقاوم به اتامبوتول و 17 سویه حساس به این دارو بودند. انجام PCR، باند 167 را ارائه نمود که نشان‌دهنده انتخاب صحیح پرایمرها و تعیین برنامه مناسب آمپلی فیکاسیون بود. از 43 سویه مقاوم، 19 سویه با روش RFLP دارای موتاسیون در کدون ATG-Met 306 و 24 سویه غیر موتان تشخیص داده شدند. تمامی 17 سویه حساس، غیر موتان بودند. این روش برای تعیین سویه حساس دارای حساسیت و ویژگی 100درصد می‌باشد. نتایج تعیین توالی، انطباق کامل با نتایج PCR-RFLP را نشان داد.نتیجه گیری: نتایج مطالعه حاضر نشان می‌دهد که روش PCR-RFLP می‌تواند به عنوان یک روش ساده و سریع برای تعیین حساسیت به اتامبوتول در سویه‌های مایکوباکتریوم توبرکلوزیس مورد استفاده قرار گیرد.