ارزیابی حساسیت سه پرایمر مختلف با استفاده از روش RFLP -PCR برای تمایز مولکولی مایکوباکتریوم‌های آتیپیک

Abstract

با افزایش عفونت های ناشی از مایکوباکتریوم های آتیپیک (Non- tuberculosis mycobacterium NTM) در سال های اخیر، تشخیص سریع این دسته از اهمیت ویژه ای برخوردار است. از آنجایی که روش‌های فنوتیپی وقت‌گیر و پرهزینه هستند، امروزه از روش های مولکولی به طور وسیعی برای شناسایی و تمایز گونه های مختلف مایکوباکتریوم ها استفاده می‌شود. هدف ازاین مطالعه، تمایز مولکولی مایکوباکتریوم های آتیپیک با استفاده از سه پرایمر TB و 16S-23S rRNA gene spacer و hsp65 در روش RFLP -PCR و ارزیابی حساسیت این پرایمرها است. مواد و روش‌ها: بررسی روی 48 نمونه مایکوباکتریوم آتیپیک جدا شده از بیماران مبتلا به سل ریوی که توسط تست‌های فنوتیپی شناسایی شده بودند، صورت گرفت. حساسیت دارویی با روش نسبی (Proportional method) انجام و قطعاتی از ژنهای hsp65 ،16S-23S rRNA gene spacer توسط PCR تکثیریافت. سپس قطعات تکثیر یافته توسط آنزیم‌های AVaII، HpaII، HphI, HaeIII، BsteII هضم و الگوی بدست آمده روی آگارز 2% بررسی شد. بحث و نتیجه‌گیری: روش hsp65 PCR- RFLP از حساسیت و دقت بالایی برای تمایز گونه های مختلف مایکوباکتریوم‌های غیر‌توبرکلوزیس برخوردار است. یافته‌ها: از مجموع 48 نمونه، 8 نمونه (6/16%) MDR (مقاوم به چند دارو)، 4 نمونه ( 3/8%) حساس و 36 نمونه (75%) غیرMDR (مقاوم به یک دارو) بود. 13 نمونه (27%) تند رشد و سایر نمونه ها ( 73%) کند رشد بود. سرعت تشخیص پرایمر hsp65 در روش PCR- RFLP، در بسیاری از گونه ها بالاتر از بقیه پرایمر ها گزارش شد.