تولید پپتید ضد میکروبی درماسپتین B1 نوترکیب در سیستم کشت ریشه‌های موئین توتون و زیست‌سنجی اثرات ضد باکتریایی

Abstract

مقدمه: کشت ریشه‌های موئین راهکاری مناسب برای تولید پروتئین‌های نوترکیب در گیاهان است. پپتیدهای ضد میکروبی، بخش حیاتی و مهم از سیستم پاسخ ایمنی ذاتی همه موجودات زنده محسوب می‌شوند. فعالیت انتخابی دقیق و اثرات سمی محدود روی سلول‌های پستانداران، پپتیدهای ضد میکروبی را به کاندیداهای مناسبی برای جایگزینی آنتی‌بیوتیک‌ها در معضل مقاومت‌های دارویی بدل ساخته است. هدف از تحقیق حاضر، تولید پپتید ضد میکروبی نوترکیب درماسپتین B1 در ریشه‌های موئین گیاه توتون و بررسی اثرات ضد باکتریایی آن بود.

مواد و روش­ ها: توالی کدکننده‌ی درماسپتین B1 در یک ناقل بیانی همسانه سازی شد و برای تولید ریشه‌های موئین توسط Agrobacterium rhizogenes به توتون منتقل گردید. با استفاده از تکنیک‌های PCR و RT-PCR، به ترتیب انتقال ترانس‌ژن و بیان آن در ریشه‌های موئین بررسی شد. فعالیت ضد باکتریایی این پروتئین نوترکیب علیه باکتری‌های Enterococcus faecium، Enterococcus faecalis و Escherichia coli در غلظت‌های مختلف پروتئین کل، مورد ارزیابی قرار گرفت.

یافته ­ها: حضور سامانه ژنی و بیان آن در ریشه‌های موئین تراریخت اثبات شد. نتایج آزمون ضد میکروبی نشان داد که غلظت‌های مختلف عصاره پروتئین کل دارای اثرات ضد میکروبی معنی‌داری (05/0P<) روی رشد هر دو گروه باکتری‌های گرم مثبت و گرم منفی بود.

بحث و نتیجه ­گیری: پپتید درماسپتین فیوژن با موفقیت در ریشه‌های موئین تولید شد و فعالیت ضد باکتریایی آن اثبات گردید. این نتایج نشان می‌دهد پپتید نوترکیب دارای خواص درمانی در کنترل پاتوژن‌ها می‌باشد؛ بنابراین از ریشه‌های موئین می‌توان برای تولید و خالص‌سازی پروتئین‌های نوترکیب ارزشمند با کاربردهای دارویی استفاده کرد.