کلونینگ و توالی‌یابی ژن کامل راپتری دو (ROP2) از توکسوپلاسماگوندی

Abstract

توکسو پلاسما گوندی یک تک یاخته داخل سلولی می‌باشد که باعث بیماری توکسو پلاسموزیس در انسان و حیوانات می‌شود. بیمارانی که نقص سیستم ایمنی دارند، عفونت مزمن این بیماری می‌تواند دوباره فعال شده و باعث آنسفالیت شود که اغلب کشنده می‌باشد. پروتئین راپتری 2 توکسو پلاسما گوندی(ROP2) یکی از میانجی‌های مهم در آمیزش ارگانل-PVM می‌باشد. پروتئین ROP2 در بدن انسان توسط کلون Tcell شناسایی می‌شود . همچنین ROP2 برای Bcell دارای اپی توپ می‌باشد. همه این ویژگی های ROP2 باعث شده که از این پروتئین به عنوان کاندید برای تهیه واکسن های نوترکیبی و کوکتلی علیه توکسوپلاسموزیس استفاده شود. بحث و نتیجه گیری: نتایج این تحقیق نشان داد که با موفقیت ژن کامل ROP2 در داخل پلاسمید pTZ57R/T کلون شده است و از این پلاسمید نوترکیب (pT-ROP2) می توان برای ساختن DNA واکسن بر علیه توکسوپلاسموزیس استفاده کرد. یافته ها: این پژوهش نشان داد که ژن کامل ROP2 در داخل پلاسمید pTZ57R/T کلون شده و پلاسمید نوترکیب (pT-ROP2)را تشکیل می‌دهد. توالی‌یابی ژن کامل ROP2 که در داخل وکتور pTZ57R/T کلون شده است، نشان دادکه توالی ژن کامل ROP2 از سوش بسیار بیماریزای توکسوپلاسما گوندی (معروف به سوش RH)شباهت زیاد 98 درصدی با سوش RH موجود در بانک ژنی دارد. (Gen bank Accession No.Z36906.1). مواد و روش ها: در این مقاله کلونینگ و توالی یابی ژن کد کننده پروتئین کامل ROP2 از توکسوپلاسما گوندی توصیف خواهد شد. در این تحقیق ، ابتدا DNA ژنومی توکسوپلاسما گوندی استخراج شده و از آن برای تکثیر ژن کامل ROP2 با استفاده از پرایمرهای اختصاصی طراحی‌شده استفاده گردید.سپس محصول PCR در داخل وکتور pTZ57R/T کلون شده و متعاقبا پلاسمید کلون شده در باکتری E.Coli ترانس‌فورم شده و به دنبال آن پلاسمید حاوی ژن کامل ROP2(pT-ROP2)که توسط هضم آنزیمی و PCR تایید شده بود، از باکتریهای ترانس‌فورم شده، استخراج گردید و از آن برای توالی‌یابی ژن کامل ROP2 استفاده گردید