ساخت وکتور ریپورتر القایی لوسیفراز برای ردیابی فعالیت ویروس HTLV-1

Abstract

font face=Times New Roman size=3 /fontp class=MsoNormal style=margin: 0in 0in 0pt text-align: justify line-height: normal unicode-bidi: embed direction: rtl text-justify: kashida text-kashida: 0% dir=rtlbspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptزمینه و هدف/span/bspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0pt: ویروس /spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrHTLV-1/spanspan dir=rtl/spanspan style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span span lang=AR-SAfont face=B Mitra size=2(/font/span/spanspan dir=ltr/spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrspan dir=ltr/span(Human T_cell lymphotropic virus type/spanspan dir=rtl/spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span با حدود 20 میلیون نفر آلوده در جهان یک مشکل بهداشت جهانی است که در مناطقی مثل ژاپن و خراسان ایران اندمیک است. این ویروس عامل بیماری پیشرونده لوسمی سلول های /spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrT/spanspan dir=rtl/spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span بزرگسالان (/spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrATL/spanspan dir=rtl/spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span) می‌باشد که دارویی تائید شده موثر بر علیه آن تاکنون وجود ندارد. به دلیل خصوصیات غیر سیتولیتیکی و انتقال سلول به سلول این ویروس، مطالعات دارویی در کشت سلولی بر روی این ویروس با روش های معمول در آزمایشگاه /spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrIn vitro )/spanspan dir=rtl/spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span) کم بوده و منحصر به چند رده سلولی آلوده به آن می‌باشد/spanspan dir=ltr/spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrspan dir=ltr/span ./spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptبنابراین ساخت وکتور ریپورتر برای ارزیابی عفونت ویروس /spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrHTLV1/spanspan dir=rtl/spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span در کشت سلولی به جهت مطالعات دارویی ضروری به نظر می رسد. ریپورتر های ساخته شده برای رتروویروس ها معمولاً بر اساس ترانس اکتیویشن ناحیه /spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrLTR/spanspan dir=rtl/spanspan style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span span lang=AR-SAfont face=B Mitra size=2می باشد. ناحیه /font/span/spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrLTR/spanspan dir=rtl/spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span در ژنوم ویروس شامل پروموترویروس است که در تکثیرو نسخه برداری آن، تحت تاثیر پروتئین ویروسی /spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrTax/spanspan dir=rtl/spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span نقش دارد.o:p //span/pfont face=Times New Roman size=3 /fontp class=MsoNormal style=margin: 0in 0in 0pt text-align: justify line-height: normal unicode-bidi: embed direction: rtl text-justify: kashida text-kashida: 0% dir=rtlbspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptروش کار/span/bspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0pt:/spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Yagutfont size=3 /font/spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptمنطقه پروموتری /spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrLTR/spanspan dir=rtl/spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span ویروس با استفاده از آنزیم محدود کننده از پلاسمید /spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrpUCLTR-Lacz/spanspan dir=rtl/spanspan style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span span lang=AR-SAfont face=B Mitra size=2بریده و در وکتور بدون پروموتر /font/span/spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrpGL4.17/spanspan dir=rtl/spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span که حامل ژن ریپورتر لوسیفراز است در بالادست ژن لوسیفرازساب کلون شد. ابتدا کلونینگ با /spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrcolony PCR/spanspan dir=rtl/spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span، هضم آنزیمی وتعیین توالی تایید شد. سپس سلول /spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrT/spanspan dir=rtl/spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span293 باوکتور نوترکیب ترانسفکت شد وبیان القایی لوسیفراز مورد تایید قرار گرفت./spanspan lang=FA style=font-family: B Mitra mso-bidi-language: FA mso-ascii-font-family: Calibri mso-hansi-font-family: Calibrio:p //span/pfont face=Times New Roman size=3 /fontp class=MsoNormal style=margin: 0in 0in 0pt text-align: justify line-height: normal unicode-bidi: embed direction: rtl text-justify: kashida text-kashida: 0% dir=rtlbspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptیافته‌ها:/span/bspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 13pt mso-bidi-language: FA /spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptوکتور نوترکیب تولید شده درسلول /spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrT/spanspan dir=rtl/spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span293 پس از کوترانسفکت با وکتور بیانی/spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrTax/spanspan dir=rtl/spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span باعث بیان قابل ملاحظه ی لوسیفراز تا 50 برابر درسلول‌های مورد آزمایش نسبت به کنترل شد.o:p //span/pfont face=Times New Roman size=3 /fontp class=MsoNormal style=margin: 0in 0in 0pt text-align: justify line-height: normal unicode-bidi: embed direction: rtl text-justify: kashida text-kashida: 0% dir=rtlbspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptنتیجه‌گیری:/span/bspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0pt با توجه به قابلیت بالای وکتور نوترکیب تولید شده، می تواند درمطالعات بعدی درساخت رده سلولی نشانگر برای ویروس /spanspan style=font-family: Times New Roman,serif font-size: 9pt mso-bidi-font-family: B Mitra mso-bidi-font-size: 10.0pt dir=ltrHTLV-1/spanspan dir=rtl/spanspan lang=AR-SA style=font-family: B Mitra font-size: 10pt mso-ascii-font-family: Times New Roman mso-hansi-font-family: Times New Roman mso-ansi-font-size: 9.0ptspan dir=rtl/span، به جهت مطالعات پایه ای و دارویی به کار رود.o:p //span/pfont face=Times New Roman size=3 /font