بهینه سازی تولید پپتیبادی رومیپلاستیم نوترکیب در اشرشیا کلی

Abstract

پیش‌زمینه و هدف: رومیپلاستیم یک پروتئین پیوندی می‌باشد که در بدن عملکردی مشابه با پروتئین ترومبوپویتین دارد و بدین وسیله باعث تحریک مغز استخوان برای ساخت بیش‌تر پلاکت می‌شود. ترومبوپویتین هورمونی است که تولید پلاکت را کنترل می‌کند. داروی رومیپلاستیم در درمان ترومبوسیتوپنی در بیماران دارای ایمیون ترومبوسیتوپنی مزمن (ITP) زمانی که سایر داروها مانند گورتیکواستروئیدها و ایمنوگلوبولین ها و یا عمل جراحی برداشتن طحال جواب نداده باشد، استفاده می‌شود. هدف از این مطالعه، کلونینگ و بهینه‌سازی شرایط بیان ژن و خالص‌سازی پپتیبادی رومیپلاستیم نوترکیب در باکتری اشرشیا کلی بود. مواد و روش کار: در این مطالعه کاربردی، متغیرهای مستقل مورد استفاده شامل میزان OD (4/0، 8/0 و 2/1) در طول موج 600 نانومتر، غلظت IPTG (5/0، 1 و 5/1 میلی مولار) و نوع محیط کشت (LB, TB, M9) بودند که از روش سطح پاسخ (RSM (Response Surface Methodology)) در قالب طرح مرکب مرکزی با نرم‌افزار Design-Expert 12 برای پیش‌بینی متغیرهای مستقل بر میزان تولید رومیپلاستیم استفاده گردید. یافته‌ها: میزان OD برابر 8/0، غلظت IPTG برابر 1 میلی مولار و محیط کشت LB بهترین حالت برای تولید پپتیبادی رومیپلاستیم نوترکیب بهینه سازی شد. بحث و نتیجه‌گیری: از آنجائیکه تولید بهینه پپتیبادی مورد نظر بود، کلونینگ و بهینه‌سازی شرایط بیان ژن و خالص‌سازی پپتیبادی رومیپلاستیم در سویه BL21 از باکتری اشرشیا کلی با بهینه‌ترین شرایط که توسط RSM انجام گردید، صورت گرفت. همچنین برای اینکه پروتئین به نحو صحیح فولد شود، از مرحله ریفولدینگ در ابتدای خالص‌سازی استفاده شد. پروتئین‌های دارویی نقش مهمی در درمان‌های نوین پزشکی مولکولی دارند.