تولید و خالص‌سازی آنتی‌بادی پلی کلونال علیه مولکول CD166 خرگوش

Abstract

پیش‌زمینه و هدف: CD166 یک مولکول چسبنده لکوسیت فعال‌شده (ALCAM) است و به‌عنوان مولکول چسبنده سلول به سلول عمل می‌کند. CD166 نقش مهمی در زنده ماندن، رشد و تهاجم سلول‌های سرطانی دارد. این پژوهش به‌منظور تهیه آنتی‌بادی پلی کلونال علیه آنتی‌ژن CD166 طراحی گردید. مواد و روش کار: پپتید انتخاب‌شده از مولکول CD166 سنتز شده و پس از کانژوگه شدن با پروتئین KLH، در امولسیونی با ادجونت کامل فروند، به دو خرگوش ماده نیوزیلندی به‌صورت زیر جلدی و در چند نوبت تزریق شد. سپس آنتی‌بادی‌های موجود در سرم خرگوش با روش FPLC تخلیص شده و مقدار آن با روش الیزای غیرمستقیم تعیین گردید. با روش خالص‌سازی ژل سیانوژن-بروماید، آنتی‌بادی‌های اختصاصی بر ضد پپتید CD166 متصل به KLH جداشده، و غلظت آنتی‌بادی تولیدی علیه پپتید یا پپتید -KLH با روش الایزا تعیین گردید. یافته‌ها: بعد از تزریق مکرر پپتید CD166 متصل به KLH، آنتی‌بادی بر ضد پپتید CD166 تولیدشده ولی از تیتر پایینی برخوردار بود. بخش عمده‌ای از آنتی‌بادی تولیدی علیه قسمت اتصال پپتید–KLH ساخته شده بود. همچنین تمایل آنتی‌بادی‌های تولیدی برای اتصال به پپتید–KLH در مقایسه با پپتید به‌تنهایی بیشتر بود. بحث و نتیجه‌گیری: آنتی‌بادی‌های تولیدی، بیشتر بر ضد شاخص آنتی‌ژنی پپتید–KLH بود. سنتتیک و کوچک بودن پپتید تزریق‌شده می‌تواند دلیلی برای کم بودن تیتر و میل اتصال آنتی‌بادی به آن باشد.