تهیه و بررسی خواص کونژوگه اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزا با نانوذره طلا

Abstract

پیش‌زمینه و هدف: سودوموناس آئروژینوزا یک پاتوژن فرصت طلب و مهمترین عامل عفونت‌های بیمارستانی است که به کمک فاکتورهای ویرولانس مختلف ازجمله اگزوتوکسین A باعث سپتی‌سمی و مرگ‌و‌میر در بیماران می‌شود. در طی این مطالعه اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزا به‌عنوان یک فاکتور توکسیک، باهدف به دست آوردن یک ترکیب جدید کاندید واکسن و نوترکیب تهیه شده و با نانوذرات طلا کونژوگه و اثرات ایمنی‌زایی آن در مدل حیوانی مورد ارزیابی قرار گرفت. مواد و روش کار: اگزوتوکسین A ذاتی (native) ابتدا از محیط کشت سودوموناس آئروژینوزا با رسوب انتخابی و دیالیز استخراج و خالص سازی شد. جهت تولید اگزوتوکسین A نوترکیب، DNA ژنومی این باکتری به وسیله وکتور مناسب در اشرشیا کلی کلون شد. نانوذرات طلا با استفاده از روش ترکویچ (Turkevich) تهیه و با نیروی الکترواستاتیکی به اگزوتوکسین A آماده شده کونژوگه شدند. در نهایت اندازه و کونژوگاسیون به ترتیب با استفاده از میکروسکوپ الکترونی و طیف‌سنجی تبدیل فوریه فروسرخ (FTIR) تأیید شد. در نهایت داده‌های کمی به‌صورت میانگین سه بار تکرار و انحراف استاندارد و همچنین داده‌های کیفی به‌صورت فراوانی (درصد) ارائه شد. یافته‌ها: نتایج به دست آمده نشان داد که اگزوتوکسین A سودوموناس آئروژینوزا از محیط کشت با خلوص نسبی قابل استخراج است. همچنین بیان پروتئین نوترکیب به وسیله اشرشیا کلی و استفاده از وکتور PET22b اشرشیا کلی منجر به تولید اگزوتوکسین A نوترکیب در غلظت بالا شد. سپس نانوذرات طلا با هر دو اگزوتوکسین A ذاتی و نوترکیب کونژوگه شد. نتایج به دست آمده نشان داد که نانوذره طلا با اگزوتوکسین A به‌خوبی کونژوگه می‌شود. بحث و نتیجه‌گیری: به‌طور کلی مطالعه حاضر نشان داد که می‌توان اگزوتوکسین A نوترکیب و ذاتی را با غلظت بالا در آزمایشگاه تولید و با نانوذره طلا کونژوگه کرد.